當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時,，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,，確定污染物是細(xì)菌、真菌,、支原體或酵母,，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,，檢查HEPA過濾器,。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而,，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟,。

1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度,。

2）分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,，或幾個小培養(yǎng)瓶中,。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中,。例如,，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25,，0.50,，1.0，2.0,，4.0,8.0 mg/ml,。

3）每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落,，出現(xiàn)空泡,，匯合度下降和變圓。

4）確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2-3代,。

5）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

6）重復(fù)步驟4,。

7）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,，確定污染是否以已被消除。

消除組織培養(yǎng)污染的小技巧

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