生物通報(bào)道：在使用殺傷性武器的時(shí)候，不傷及無辜很重要,，對(duì)于RNA干涉（RNAi）來說也是如此,。RNAi是一種常用的基因失活工具，它的主要缺陷在于會(huì)引起序列特異性的脫靶效應(yīng),。這樣的脫靶效應(yīng)很難預(yù)測(cè),，因?yàn)?/span>siRNA能夠影響與它部分互補(bǔ)的序列，像miRNA那樣抑制基因的表達(dá),。

要減少脫靶效應(yīng),，可以將針對(duì)同一mRNA的不同siRNA混合起來使用。這些siRNA作用于同一個(gè)目標(biāo),，每種siRNA的濃度得以降低,，稀釋了各自的脫靶效應(yīng)。然而,，這一策略在實(shí)際操作中面臨著兩個(gè)問題,。其一，目前“Smart pools”只包括四個(gè)合成的siRNA,，復(fù)雜性還不足以顯著減少脫靶效應(yīng),，而合成更多siRNA的成本又太高。其二,，利用Dicer或RNase III消化dsRNA時(shí),，siRNA混合物中會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)度各異的剪切產(chǎn)物，進(jìn)而引發(fā)許多問題,。

日前,，Regensburg大學(xué)的Gunter Meister領(lǐng)導(dǎo)研究團(tuán)隊(duì)在Nucleic Acids Research雜志上發(fā)表文章，描述了一種能克服上述問題的新方法。這種被稱為siPools的低成本方法,，能夠簡(jiǎn)單而的生成含有多達(dá)60種siRNA的混合物,，將脫靶效應(yīng)降低到檢出限以下。

據(jù)介紹,，siPools的關(guān)鍵一步是,，設(shè)計(jì)針對(duì)同一個(gè)基因的幾十種siRNA，并將這些序列結(jié)合到一個(gè)DNA模板上,，不同siRNA序列之間以短序列相連,。這些模板經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、退火和酶切就能生成成分明確的siRNA混合物,。

為了驗(yàn)證siPools的效果,，研究人員選擇人類基因POLG和SCYL1作為RNAi的靶標(biāo)。之前有研究顯示,，針對(duì)這兩個(gè)基因的siRNA很容易影響到MAD2基因的表達(dá),，因此它們可以作為檢測(cè)脫靶效應(yīng)的理想對(duì)象。

研究人員針對(duì)這兩個(gè)基因,，分別設(shè)計(jì)了含有60個(gè)siRNA的siPools,，然后用它們轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。研究顯示,，在濃度相同的情況下,，siPools敲低目標(biāo)基因與單個(gè)siRNA一樣有效。

這兩個(gè)siPools都含有一個(gè)MAD2脫靶效應(yīng)很強(qiáng)的siRNA,。然而在轉(zhuǎn)染之后,，MAD2上并未發(fā)生可檢測(cè)到的脫靶影響。研究人員隨后又通過螢光素酶報(bào)告基因證實(shí)了這一點(diǎn),。

此外,，研究人員還進(jìn)行了全轉(zhuǎn)錄組的芯片分析。他們發(fā)現(xiàn),，單個(gè)脫靶siRNA除了MAD2以外還大大減少了許多其他的轉(zhuǎn)錄本,，但siPools對(duì)MAD2和總體轉(zhuǎn)錄本水平都沒有影響。這說明,，將大量siRNA混合起來的確能夠大大降低RNAi的脫靶效應(yīng),。下一步，Meister將進(jìn)一步評(píng)估siPools在活體內(nèi)作用效果,。

值得注意的是,，Meister等人還將siPools成功用于長(zhǎng)非編碼RNA（lncRNA）。單個(gè)siRNA往往難以對(duì)lncRNA施加影響,，這可能是因?yàn)閱蝹€(gè)siRNA難以接觸到高度結(jié)構(gòu)性的lncRNA分子?，F(xiàn)在,，研究團(tuán)隊(duì)正在構(gòu)建針對(duì)lncRNA的siPool文庫(kù),。

elisa試劑盒,進(jìn)口elisa試劑盒,國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒,elisa試劑盒,明膠酶譜法試劑盒,白介素Elisa試劑盒,睪酮檢測(cè)試劑盒,雌二醇檢測(cè)試劑盒,進(jìn)口elisa試劑盒 -上海信帆生物科技有限公司