1.配制溶液

　　向容器內加入所需水量的一部分,，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料,，依次加入使其溶解,，zui后補足所需水分,。對蛋白胨、肉膏等物質,，需加熱溶解,，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應在全部原料溶解后加水補足,。

　　配制固體培養(yǎng)基時，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸,，再將稱好的瓊脂加入,，繼續(xù)加熱至*融化,。并不斷攪拌,，以免瓊脂糊底燒焦,。

　　2.調節(jié)pH值

　　用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養(yǎng)基的pH值,，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節(jié),，直到調節(jié)到配方要求的pH值為止。

　　3.過濾

　　用濾紙,、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾。用紗布過濾時,，折疊成六層，用濾紙過濾時,，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾,。

　　4.分裝

　　已過濾的培養(yǎng)基應進行分裝,。如果要制作斜面培養(yǎng)基,，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體,、半固體培養(yǎng)基,，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內。

　　分裝時,，一手捏松彈簧夾,，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶,，依次接取培養(yǎng)基,。分裝時，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口,，以免浸濕棉塞引起雜菌污染,。

　　裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定,。一般制作斜面培養(yǎng)基時,，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升（1/4～1/3試管高度）,，如制作深層培養(yǎng)基,，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基,，一般以其容積的一半為宜,。

　　5.加棉塞

　　分裝完畢后，需要用棉塞堵住管口或瓶口,。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,，避免污染。棉塞應采用普通新鮮,、干燥的棉花制作,，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用,。制作棉塞時,，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,，用右手食指插入棉花中部,，同時左手食指與姆指稍稍緊握，就會形成1個長棒形的棉塞,。棉塞作成后,，應迅速塞入管口或瓶口中，棉塞應緊貼內壁不留縫隙,，以防空氣中微生物沿皺折侵入,。棉塞不要過緊過松,，塞好后,，以手提棉塞,、管,、瓶不下落為合適,。棉塞的2/3應在管內或瓶內,，上端露出少許棉花便于拔取,。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆札,，準備滅菌,。

　　6.制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

　　培養(yǎng)基滅菌后,，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,，須趁培養(yǎng)基未凝固時進行,。

　　(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條,，厚度為1厘米左右,。將試管頭部枕在木條上，使管內培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基,。

　　(2)制作平板培養(yǎng)基,。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上，點燃酒精燈,，右手托起錐形瓶瓶底,，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,，左手打開培養(yǎng)皿蓋,，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10毫升,，以鋪滿皿底為度,。鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右，待培養(yǎng)基凝固后,，再5個培養(yǎng)皿一疊,，倒置過來，平放在恒溫箱里,，24小時后檢查,，如培養(yǎng)基末長雜菌，即可用來培養(yǎng)微生物,。