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上海信帆生物代做PCR實驗,,包括實時熒光定量PCR,,電泳PCR等,,歡迎,。
什么是PCR實驗的靈敏度?
靈敏度指的是PCR擴增反應(yīng)能夠檢測到目的基因的zui小值。研究結(jié)果表明,,影 響PCR擴增效率的因素,,如模板的復(fù)雜程度與完整性、引物的純度及其與模板的結(jié)合效率,、反應(yīng)溫度,、DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性與擴增性能、反應(yīng)緩沖液的離子組 成(主要指陽離子),、反應(yīng)優(yōu)化劑等等,,都決定了PCR實驗的檢測靈敏度。在*的擴增條件下,,常規(guī)PCR反應(yīng)能夠檢測到的pg(10-12g)數(shù)量級的目 的基因,。對于一個特定的目的基因而言,模板與引物通常都是已經(jīng)限定好的因素,。因此,選擇什么樣的PCR反應(yīng)體系(包括DNA聚合酶與反應(yīng)緩沖液等)就是研 究者提高PCR實驗靈敏度的關(guān)鍵因素了,。
與實驗室自配的PCR擴增體系相比,,東盛的Taq Mix對反應(yīng)緩沖液中的成分進行優(yōu)化,并加入了適當比例的反應(yīng)增強劑(PCR Enhancer),,提高了DNA聚合酶的熱穩(wěn)定性,,顯著降低模板的二級結(jié)構(gòu)對PCR擴增性能的影響,使得DNA聚合酶處于zui適活性狀態(tài),,從而獲得了比自 配體系更高的檢測靈敏度,。即時反應(yīng)體系中只有幾個目的基因的拷貝,也能輕松檢測,。
什么是PCR實驗的特異性,?
特異性指的是在PCR擴增過程中,專一性地擴增目的片段而非其他片段的性 能,。在PCR實驗本身的靈敏度很高,,且實驗條件未充分優(yōu)化的情況,通常會在目的片段出現(xiàn)的同時伴隨有其他的雜帶,,即發(fā)生非特異性擴增的現(xiàn)象,。模板、引物性 質(zhì)及質(zhì)量,、反應(yīng)條件的控制等均會影響PCR擴增的特異性,。近年來的研究結(jié)果表明,,緩沖液的品質(zhì)(如離子種類與組成,反應(yīng)優(yōu)化劑等)對保證PCR的特異性擴 增起著不可忽視的作用,。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),顯著提高了PCR擴增的特異性,,降低背景,。
PCR實驗的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調(diào)節(jié)實際就是找到適合實驗的靈敏度與特異性的平衡點,。由于PCR體系中的眾多成分,,使得組合較多,篩選工作繁雜,。東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計了PCR Mix和HS Taq Mix,,幫您確定大的平衡點,如果您需要更細致的平衡點,,請選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進行微調(diào),。
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