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時間：2015/1/19閱讀：1301

上海信帆生物：

人Toll樣受體9ELISA試劑盒
人TLR-9/CD289試劑盒		人TLR-9/CD289 ELISA KIT
Human Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA kit

產品中文：	人Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISA試劑盒
產品英文：	Human Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA kit
貨號：	XF00970B
規(guī)格：	48T/96T
保質期：	6個月
保存條件：	2到8度

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人Toll樣受體9ELISA試劑盒,人TLR-9/CD289試劑盒

ELISA技術原理：以免疫學反應為基礎，將抗原,、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來.
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,。
2. 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性,。
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應,。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上,。
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例,。
6. 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物,，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平）,，并且重復性好,。
人Toll樣受體9ELISA試劑盒,人TLR-9/CD289試劑盒
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樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心,。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為30ng/L，20ng/L ,，10ng/L,，5ng/L， 2.5ng/L）,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
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