Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用說明

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF（Strep-Tactin Berpharose FF）

1.      產品介紹

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF是一種將Strep-Tactin鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質,，主要用于純化Strep II標簽蛋白。Strep II標簽為8個氨基酸的小標簽（WSHPQFEK）,，由于標簽小，僅為1kDa左右,，一般不影響融合后蛋白質的結構和功能,，常用于融合表達蛋白質的檢測和純化,。

本產品的配基Strep-Tactin是鏈霉親和素（Streptavidin）的突變體,，與鏈霉親和素相比,，Strep-Tactin對Strep II標簽的親和能力至少強10倍以上,，能夠在溫和的條件下與Strep II融合蛋白結合和解離。由于Strep-Tacin對Strep II標簽具有高度特異性,，一般一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品,。

Strep II標簽蛋白與凝膠結合后可使用脫硫生物素競爭方式進行洗脫，該洗脫方式比較溫和,，一般不會影響蛋白質的性質,。如蛋白質能耐受一定的堿，也可用堿液洗脫,，比如10mM NaOH等,。Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF能耐受較高的堿清洗,，可以用0.5M NaOH進行再生清洗和去除熱源等。另外,，2-(4-羥基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝膠再生,，過量的HABA能夠競爭下脫硫生物素，并且在無HABA的緩沖液中,，能將凝膠上的HABA洗脫。

2.規(guī)格

1ml（預裝柱）,、5ml（預裝柱）,、10ml（預裝柱）、20ml,、100ml,、500ml

3.產品性能

4.純化流程

①推薦緩沖液

純化Strep II標簽蛋白

結合緩沖液：100mM Tris-HCl,，150mM NaCl,，1mM EDTA，pH8.0,；

或20mM NaH2PO4,，280mM NaCl，6mM KCl,，pH7.4

洗脫緩沖液：結合緩沖液+ 2.5mM脫硫生物素,；

或10mM NaOH

再生緩沖液：0.5M NaOH；

或結合緩沖液+1mM HABA

②樣品準備

上柱的樣品應盡量保持與結合緩沖液一致,。通?？捎猛肝觥⒊瑸V,、稀釋等方法處

理樣品,。并且上柱前應過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化

（1）平衡：取適量的Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中,，用蒸餾

水清洗5個柱體積去除保存液,，再用結合緩沖液平衡5個柱體積，建議流速為100cm/h,。

（2）上樣：將準備好的樣品上柱,，建議流速為20-100cm/h，可根據實際結合情

況選擇流速,，能獲得較好的效果,。

（3）再平衡：上樣后用結合緩沖液平衡10個柱體積以上，或平衡至基線,，洗去

雜質,，推薦流速為100cm/h,。

（4）洗脫：用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積，建議流速為100cm/h,，收集的洗脫

液應立即調節(jié)pH至穩(wěn)定范圍,，并根據需要置換緩沖液。

（5）NaOH再生：洗脫目的蛋白后的柱子用蒸餾水清洗3-5個柱體積,，并用0.5M

NaOH再生3-5個柱體積,，再用蒸餾水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子,，或進行下

一次純化,。

（6）HABA再生：用脫硫生物素洗脫目的蛋白的，還可以用HABA緩沖液再生,，

一般用HABA的結合緩沖液洗15個柱體積,，再用結合緩沖液洗30個柱體積，然后可

以用20%乙醇保存柱子,，或進行下一步純化,。HABA上柱后凝膠顏色會變?yōu)榧t橙色，

在結合緩沖液平衡后會恢復正常的白色,，這種再生方式一般使用體積會大些,。

5.注意事項：

1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡,，影響純化效果,。

2)本產品保存條件為20%乙醇，4~8℃,。

3) 2-25℃,常壓,避光運輸

4）僅供科研實驗使用

Strep-Tactin瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用說明