油紅O染色液實驗流程及注意事項,！

脂質(zhì)(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱，其共同的物理特性是不溶于水,，易溶于有機(jī)溶劑(如乙醇,、乙MI等)。人體的脂肪主要有兩種：1,、儲存脂肪,，如中性脂肪，主要分布于皮下,、腎,、胰腺等部位；2,、結(jié)構(gòu)脂肪,，如類脂(磷脂、糖脂,、膽固醇等),，主要分布于細(xì)胞內(nèi)。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,，呈中性,。中性脂肪染色經(jīng)常采用蘇丹II、蘇丹III,、蘇丹IV,、蘇丹黑B、油紅O法等,，傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料,，最近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色，油紅O是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑,，較易與甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀,，與磷脂結(jié)合力稍差，其染色原理一般認(rèn)為是物理上的溶液作用或吸附作用,，借溶液作用使脂肪染色,。

油紅O染色液(培養(yǎng)細(xì)胞專用)主要用于顯示人工培養(yǎng)細(xì)胞的脂肪變性和類脂質(zhì)的異常沉著，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多數(shù)中性脂肪滴,，鑒別培養(yǎng)細(xì)胞中所發(fā)生的變化及其性質(zhì),，標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液，脂肪的陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色,，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定,。

產(chǎn)品名稱：油紅O染色液（細(xì)胞專用）

產(chǎn)品規(guī)格：4×20ml

儲存條件：4℃

有效期：12個月

用途：專門用于脂肪/脂滴染色

產(chǎn)品組成

自備材料：

60%異丙醇,、蒸餾水

實驗步驟（僅供參考）：

一,、培養(yǎng)細(xì)胞

1、 移除細(xì)胞培養(yǎng)基,，用PBS洗兩次,，加ORO Fixative固定液固定20-30min。

2,、 棄去固定液，用蒸餾水洗2次,。

3,、 加入60%異丙醇浸洗5min。

4,、 棄去60%異丙醇后加入新配制好的ORO Stain,，浸染10-20min。

5,、 棄去染色液,，水洗2-5次，直到無多余染液,。

6,、 加入Mayer蘇木素染色液，復(fù)染核1-2min,。棄去染液后水洗2-5次,。

7、 入ORO Buffer 1min,，棄去,。

8、 加入蒸餾水覆蓋細(xì)胞并在顯微鏡下觀察,。

二,、細(xì)胞涂片

1、 制備新鮮骨髓,、血液涂片,，入ORO Fixative固定10～15min。

2,、 取出涂片,，放于流通的空氣中10～15min。

3,、 入新配制好的ORO Stain,，浸染15min,。

4、 入60%異丙醇漂洗20～30s,，流水沖洗,，入蒸餾水稍微清洗。

5,、 入Mayer蘇木素染色液,，復(fù)染核2min。

6,、 入ORO Buffer 1min,。

染色結(jié)果：

注意事項:

1、 ORO染色液不夠穩(wěn)定,，易產(chǎn)生沉淀,，不宜提前配制。

2,、 Mayer 蘇木素染色液復(fù)染時間不能過長,。

3、 染色結(jié)果不能長期保存,，應(yīng)盡快觀察及照相,。

4、 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

5、本產(chǎn)品僅供科研實驗用,，不做其它用途,！