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上海信帆生物供應(yīng)真菌RNA提取試劑盒,,產(chǎn)品有大量現(xiàn)貨,除此之外我們還備有血液RNA提取試劑盒,,病毒RNA提取試劑盒等等,,歡迎大家咨詢!
真菌RNA快速提取試劑盒適用于各種形態(tài)和各個(gè)種屬的真菌及革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,,包括 Candida albican,、Saccharomyces cerevisiae、 Schizosaccharomycespombe,、Pichiapastoris,、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus 等,。
(一)菌體裂解:
1.將 50 mg 的干菌絲(或 100 mg的鮮菌絲,、或適當(dāng)數(shù)量的真菌菌落)轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 離心管中,。對(duì)于液體真菌培養(yǎng)物,,在1.5mL離心管中多次離心收集1-10 mL 的菌體沉淀。
2.在菌體沉淀中加入 0.4 mL 裂解液I震蕩混勻,。
注:如果裂解液I存放時(shí)產(chǎn)生沉淀,,請(qǐng)置于 65℃融化后使用。
3.加入 0.4 mL裂解液II,,劇烈震蕩 30 s后65℃水浴 5 min,。
4.12,000-15,000 rpm 離心3 min ,轉(zhuǎn)移上清到1.5 mL離心管中,。
5.在上清中加入0.1 mL 的裂解液II和0.1mL氯方(自備)震蕩 30 s混勻,。
6. 12,000-15,000 rpm 離心3 min ,,轉(zhuǎn)移上清到5 mL 離心管中。
(二)RNA收集:
1. 在步驟(一)所得的上清中加入3倍體積(約1.5 mL )的結(jié)合液III和1倍體積(約0.5 mL)的結(jié)合液IV,,顛倒數(shù)次混勻后,,分多次上RNA吸附柱,每次上柱后均先室溫放置 2 min,,然后 12,000 rpm 離心 1 min,,倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中加入500 μL洗滌液,,12,000 rpm離心1 min,,棄穿透液。
3. 再將吸附柱12,000 rpm離心30 s以甩干乙醇,。
4. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的1.5 mL離心管中,。在吸附柱中央加入50 μL洗脫液,室溫靜置2 min,。
5. 12,000 rpm離心2 min,。離心管中溶液即為 RNA 樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用,。
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