T細(xì)胞亞群試劑盒如何使用，操作過程詳解

上海信帆生物供應(yīng)T細(xì)胞亞群測(cè)試盒,，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，庫(kù)存充足,，深受廣大科研用戶青睞,！

T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒說明書

一：試劑盒組成：

二：標(biāo)本制備：

取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1～2ml，PBS稀釋1-2倍后,，沿裝有等量淋巴細(xì)胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層,，保持兩種液體界面清晰，離心（2000轉(zhuǎn)/分）15-20分鐘,，吸取兩液面交界處的單個(gè)核細(xì)胞層,，加5倍PBS，離心（1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘,，棄上清液,，沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流液體（約一滴）混勻細(xì)胞，制成單個(gè)核細(xì)胞懸液,。滴30μl細(xì)胞懸液于載玻片上,，靜置2分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上，吸去液體,，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干,。或用PBS將單個(gè)核細(xì)胞調(diào)至2×10⁵個(gè)/ml,，離心涂片機(jī)1000轉(zhuǎn)離心1-2分鐘制片,，快速吹干或37℃溫箱1小時(shí)烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl均勻推片,，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上,，待干后制備細(xì)胞涂片，以防掉片,。

三：顯色劑的配制：

分別取A液25ul,，B液25ul置于干凈試管中混勻，室溫放置2-5分鐘,，加1ml蒸餾水,，混勻，再加C液100ul待用,。

*使用前,，根據(jù)所需顯色劑用量，按照以上比例現(xiàn)配現(xiàn)用,。

四：標(biāo)本染色：

1. 充分干燥（室溫2小時(shí)以上或過夜）的細(xì)胞涂片先用記號(hào)筆在標(biāo)本外畫圈,，然后滴加固定液50μl，室溫靜置2-3分鐘,，用PBS淋洗,，擦干玻片背面及細(xì)胞外的PBS。

*以下反應(yīng)均需在濕盒中進(jìn)行,。

2. 分別滴加抗人CD3、CD4,、CD8單抗適量(10-30μl）,4℃過夜,，PBS淋洗3次。

3. 滴加生物素標(biāo)記抗小鼠IgG適量（10-30μl）,，37℃孵育30-45分鐘,，PBS淋洗3次。

4. 滴加堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育30-45分鐘,，PBS淋洗3次,。

5. 滴加顯色劑30-50μl，室溫顯色20-40分鐘?？稍陲@微鏡下觀察,，待細(xì)胞膜上出現(xiàn)紅色標(biāo)記物時(shí)，用PBS淋洗,。

6. 滴加細(xì)胞核復(fù)染液30-50μl,，30秒后自來水淋洗。

7. 滴加封片劑,，蓋片封片,，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢,。

五：觀察：

高倍鏡下選取染色好的視野記數(shù)100-200個(gè)單個(gè)核細(xì)胞,，細(xì)胞表面有紅色標(biāo)記物為陽(yáng)性細(xì)胞。算出陽(yáng)性率,。

六：正常參考值：

正常人外周血中,，陽(yáng)性細(xì)胞百分率一般在：CD3，60-80%,；CD4,，35-55%；CD8,，20-30%,；CD4/CD8的比值在1.5-2.0范圍內(nèi)。

七：儲(chǔ)存條件及有效期：

2-8℃保存,，禁止冷凍,，有效期為12個(gè)月。有效期內(nèi)可在0-25℃范圍內(nèi)七天短時(shí)運(yùn)輸,。使用時(shí)應(yīng)及時(shí)及拿及用,，使用后應(yīng)立即放回冰箱。生物試劑日期,，使用期限或失效日期見標(biāo)簽,。

八：注意事項(xiàng)：

1. 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)是一種包含多步驟的檢測(cè)方法，試劑的選擇,、樣本的處理,、涂片的制備、染色及其結(jié)果的判讀均需要進(jìn)行專業(yè)的培訓(xùn),。

2. 任何陽(yáng)性或陰性的解讀,，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)，研究表現(xiàn)及其它檢測(cè)方法進(jìn)行,，不作為單獨(dú)的診斷指標(biāo),。

3. 復(fù)染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。

4. 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在,，待測(cè)抗原編碼基因變異,，抗原低表達(dá)或抗原修復(fù)不當(dāng)?shù)龋紩?huì)造成抗原無法檢出,。

5. 本試劑僅對(duì)經(jīng)處理的人外周血細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證,，不做其他用途

6. 試劑盒使用中，應(yīng)有適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施,，以避免試劑同皮膚和眼睛接觸,。

T細(xì)胞亞群試劑盒如何使用，操作過程詳解