甘油檢測試劑盒現(xiàn)貨供應，甘油試劑盒

上海信帆生物供應甘油檢測試劑盒現(xiàn)貨供應,，甘油試劑盒,，產品備有大量現(xiàn)貨，靈敏度高,，適用于組織,，細胞樣本，也有專門針對血清樣本的,。

甘油檢測試劑盒說明書

描述：甘油是甘油三酯的水解產物,。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯,；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細胞中的甘油三酯,。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標,，但檢測更方便,。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經典GPO-Trinder酶學反應相結合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量,。經過優(yōu)化后,，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在10-1200µmol/L,，可靠性和重復性俱佳,，適合生物醫(yī)學、食品實驗室檢測,。

參考文獻：

Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.

2.Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145

原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油,，再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺,，其光密度值與甘油濃度成正比,。

適用范圍：測定血液、細胞培養(yǎng)基、體液,、酒類飲料中的甘油濃度,。

組成 ：  

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標準品1 ml

4 ºC，儲存3個月,。

所需設備：酶標儀,、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計,。佳工作波長550nm,，如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530,、490nm,。

操作步驟：

一 樣本處理：

酒類、飲品,、清澈液體樣本：可直接進行測定,，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測定。

培養(yǎng)液：取不含酚紅,、無顏色,、無血清的細胞培養(yǎng)基，如有細胞碎片應4ºC,,，12,000g離心5min,取上清進行測定。

血液：新鮮抗凝血,，4ºC,，2,000g離心5min得到血漿；非抗凝血,，先4ºC靜置2h得到血清后,，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70ºC 加熱10分鐘滅活內源脂肪酶,，12,000g離心10min ,取上清測定或-20ºC保存,。

二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合,，立即使用或4ºC保存<1天,，變色棄去。

三 標準品稀釋：用蒸餾水,、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體,，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500,、250,、125、62.5、31.25,、15.625,、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可,，注意設置0濃度對照反應管,。

四 甘油濃度測定：

參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致,，減小實驗誤差,，可先加入標準品、待測樣品,，然后再加入工作溶液,。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,，然后再進行測定,，但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度，使反應靈敏度下降,。如果待測樣品濃度超過線性范圍,，可進行適當稀釋，然后根據稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度,。）

37ºC或25ºC反應 10分鐘,。反應平衡后顏色在60分鐘內穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調零,，然后測定各管OD值,。

繪制標準曲線并計算甘油濃度。

附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸,，標準品濃度為x軸,。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據，點擊做圖向導,，選擇-散點圖-,，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點,，點擊-添加趨勢線-,，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-,。

表一：

  酶標微板測定的加樣比例（檢測范圍10-1200µmol/L）

      （可對樣品和工作液比例進行微量調整）

表二：

1 ml比色杯測定的加樣比例（檢測范圍10-1200µmol/L）

說明：

1,、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L,、膽紅素>0.25g/L,、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試,。

2,、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L，細胞培養(yǎng)時須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基,，如果培養(yǎng)基中含有酚紅,，可以選擇含有酚紅的無細胞培養(yǎng)基作為對照進行測定

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