長時(shí)程活細(xì)胞成像Incucyte®是一款革命性的細(xì)胞成像設(shè)備,，能夠在培養(yǎng)箱內(nèi)實(shí)現(xiàn)無限時(shí)間的連續(xù)觀察。其傻瓜式的實(shí)驗(yàn)設(shè)置和分析流程,，以及精準(zhǔn)的細(xì)胞指標(biāo)計(jì)算，使得眾多用戶對其愛不釋手,。Incucyte®在細(xì)胞水平的體外實(shí)驗(yàn)中有著廣泛應(yīng)用,。
事實(shí)勝于雄辯，用文章數(shù)量說話,！在2024年第三季度,，陳老師下載了數(shù)十篇包含Incucyte®數(shù)據(jù)的國內(nèi)文章（文獻(xiàn)列表在文末哦！）,。
表1. 2024 Q3 Incucyte®文章第一作者單位分布
從文章的分布單位來看,，很多單位在一個(gè)季度內(nèi)就發(fā)了多篇文章，例如澳門大學(xué),，濱州醫(yī)學(xué)院以及電子科技大學(xué)等,。利用Incucyte®,，研究人員可以高效地獲得實(shí)時(shí)的細(xì)胞信息，并快速地獲得可信的研究成果,。足以說明Incucyte®因其簡單易用和短時(shí)間內(nèi)生成多維精準(zhǔn)數(shù)據(jù),，是發(fā)表高質(zhì)量研究文章的利器！
表2. 2024 Q3的Incucyte®文章應(yīng)用分布
Incucyte®應(yīng)用非常廣泛,，從這些文章中可以看出,，除了傳統(tǒng)的細(xì)胞增殖活性和劃痕遷移實(shí)驗(yàn)外，還有類器官,、吞噬和內(nèi)化等多種應(yīng)用,。
陳老師就選幾篇比較典型的國內(nèi)文章介紹一下
最新應(yīng)用
類器官制備外泌體
北大三院[1]
唾液來源的外泌體可加速傷口修復(fù)，但由于口腔環(huán)境復(fù)雜,，提取較為困難,。作為一種可行的替代方案，本文建立了人類小唾液腺類器官（hMSG-ORG）來產(chǎn)生外泌體 （MsOrg-Exo）,。在體外實(shí)驗(yàn)中,，MsOrg-Exo 顯著增強(qiáng)了細(xì)胞增殖、遷移和血管生成能力,。MsOrg-Exo 促進(jìn)傷口部位的增殖,、血管生成和生長因子的分泌。Incucyte®用來追蹤類器官的生長以及細(xì)胞的增殖情況,。
圖1. 連續(xù)跟蹤單細(xì)胞生長,。在第三天觀察到直徑約為 100 μm 的小球形腺泡狀類器官的形成,。隨后,，腺泡的面積逐漸增加，培養(yǎng)兩周后直徑達(dá)到 1-2 mm
為了驗(yàn)證 hMSG-ORGs 是否可以在體外模擬唾液腺功能,，研究使用毒蕈堿受體激動(dòng)劑卡巴膽,、β受體激動(dòng)劑異丙腎上腺素和非膽堿能肽神經(jīng)遞質(zhì)VIP進(jìn)行了功能性腫脹測定。Incucyte®結(jié)果顯示,，在給藥后 2 小時(shí)內(nèi),，hMSG-ORGs 中腺泡樣結(jié)構(gòu)顯著腫脹，而用 DMSO 處理的 hMSG-ORG 未觀察到顯著變化,，這表明 hMSG-ORGs 可以在體外對不同的神經(jīng)遞質(zhì)刺激做出反應(yīng),。
圖2. Incucyte® 在 5 小時(shí)內(nèi)以 2 分鐘的間隔捕獲類器官的明場圖像
將 HUVEC、HaCaT 和 HSF 細(xì)胞以 3000個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種,，然后用MsOrg-Exo處理,。在接下來的 500 小時(shí)內(nèi)，使用 Incucyte® 系統(tǒng)每小時(shí)測量一次每個(gè)孔的細(xì)胞面積,。
圖3. 用 MsOrg-Exo 處理的 HUVEC,、HaCaT 和 HSF 細(xì)胞的增殖測定,，Incucyte® 在 36 小時(shí)內(nèi)連續(xù)跟蹤細(xì)胞生長區(qū)域 （N = 3），可見MsOrg-Exo可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖,。
Incucyte®可以對類器官進(jìn)行層掃拍攝,，最快可以幾分鐘間隔拍攝。
最多數(shù)據(jù)
化療耐藥與FTO
盛京醫(yī)院[2]
化療耐藥是神經(jīng)母細(xì)胞瘤（NB）患者治療失敗的重要原因,，直接影響患者的預(yù)后,。本文研究了脂肪量和肥胖相關(guān)基因（FTO）在NB細(xì)胞對各種化療藥物的化療敏感性中的作用。FTO過表達(dá)抑制細(xì)胞增殖,，而FTO敲低促進(jìn)NB細(xì)胞增殖,。FTO的下調(diào)降低了NB細(xì)胞對紫杉醇的敏感性，而FTO的上調(diào)增強(qiáng)了其敏感性,。此外,，F(xiàn)TO表達(dá)較低和較高的患者對各種化療藥物或小分子抑制劑的敏感性不同。這一發(fā)現(xiàn)可能指導(dǎo)醫(yī)生和患者選擇合適的化療藥物或小分子抑制劑進(jìn)行治療,。文中多數(shù)數(shù)據(jù)都是Incucyte®生成的,！
圖4. 左圖為兩種NB細(xì)胞系的生長曲線，中圖為終點(diǎn)計(jì)算結(jié)果,，右圖為原始圖（黃色為細(xì)胞識別）
兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組差別不大,，但是Incucyte®對群體細(xì)胞增殖分析結(jié)果具有良好的重復(fù)性，可以判定微小差別實(shí)驗(yàn)組之間的顯著性,。
最高影響因子
巨噬細(xì)胞活化機(jī)制
首都醫(yī)科大學(xué)[3]
人組蛋白macroH2A1.2整合到核小體中不會(huì)影響它們的穩(wěn)定性或折疊動(dòng)力學(xué),，但它顯著阻礙了促進(jìn)染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄（FACT）功能。本文發(fā)現(xiàn)FACT有效地降低了macroH2A1.2-核小體的穩(wěn)定性,，確定了macroH2A1.2 中的殘基S139A突變是調(diào)節(jié)FACT在核小體維持功能的關(guān)鍵開關(guān),。S139A突變重塑macroH2A分布并影響刺激誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和巨噬細(xì)胞中的細(xì)胞反應(yīng)。本文闡明了macroH2A1.2和FACT在核小體水平上錯(cuò)綜復(fù)雜的相互作用機(jī)制,，并闡明了它們在巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控和免疫反應(yīng)中的作用,。
圖5. Incucyte®測試發(fā)現(xiàn)：將PE標(biāo)記的磁珠和巨噬細(xì)胞混合，發(fā)現(xiàn)S139A突變后的巨噬細(xì)胞的吞噬能力減弱,。15分鐘拍攝一次,，20倍鏡，共拍攝360次,。
拍攝360次，人工操作是不可能的呢,！
Incucyte®長時(shí)程活細(xì)胞
成像系統(tǒng)應(yīng)用文集
為了將Incucyte®推廣到更多活細(xì)胞實(shí)驗(yàn),，我們致力于提供全面的應(yīng)用解決方案?！禝ncucyte® 長時(shí)程活細(xì)胞成像系統(tǒng)應(yīng)用文集》除了基礎(chǔ)的細(xì)胞增殖和活性監(jiān)測外(如細(xì)胞凋亡/周期/毒性等),，還涵蓋了抗體內(nèi)化,、旁觀者效應(yīng)、共培養(yǎng)殺傷,、炎癥反應(yīng)(NETosis),、細(xì)胞吞噬、劃痕實(shí)驗(yàn),、細(xì)胞趨化,、類器官研究、腫瘤球分析,、神經(jīng)突生長,、 ATP 檢測、線粒體膜電位,、病毒/脂質(zhì)體/外泌體監(jiān)測,、全孔成像等多個(gè)方面。應(yīng)用范圍廣,，是您尋找實(shí)驗(yàn)方法的有利工具,。
為什么Incucyte®那么火熱呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)無限時(shí)間的連續(xù)觀察,，最短幾分鐘間隔拍攝,，減少人力，防止過多操作對細(xì)胞的傷害
6個(gè)板位,，分別獨(dú)立設(shè)置檢測程序,，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析,，輸出圖片,、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)
> 100種優(yōu)化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的protocol
一句話：放好您的細(xì)胞,，其他交給Incucyte®吧,！
-參考文獻(xiàn)-
[1]GelMA loaded with exosomes from human minor salivary gland organoids enhances wound healing by inducing macrophage polarization | Journal of Nanobiotechnology (springer.com)
[2]Frontiers | FTO diversely influences sensitivity of neuroblastoma cells to various chemotherapeutic drugs (frontiersin.org)
[3]FACT mediates the depletion of macroH2A1.2 to expedite gene transcription: Molecular Cell
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