T細(xì)胞有兩種CAR,，針對兩種腫瘤特異性抗原（TAA），兩種CAR帶有不同的傳導(dǎo)信號激發(fā)因子,。只有兩種CAR同時結(jié)合兩種TAA,，才能共激發(fā)對腫瘤殺傷效應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)稱為AND；一旦結(jié)合一種正常細(xì)胞表達(dá)的抗原就不激發(fā)稱為NOT,；結(jié)合一種TAA就激發(fā)稱為OR,。
最近的一篇來自于斯坦福大學(xué)的NATURE文章中[2],，作者使用ZAP-70（一種細(xì)胞內(nèi)近端T細(xì)胞信號分子）取代傳統(tǒng)的CD3ζ 結(jié)構(gòu)域分子，可以激活T細(xì)胞并在體內(nèi)根除腫瘤,，同時可以繞過上游信號傳導(dǎo),。ZAP-70的主要作用是磷酸化LAT和SLP-76，于是將LAT和SLP-76設(shè)計成基于AND的邏輯門控細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)絡(luò)（LINK CAR）,。但是從這篇文章來看,，這種AND設(shè)計并不是一帆風(fēng)順的。
這篇文章評估CAR-T細(xì)胞殺傷作用的主要方法用到了大家耳熟能詳?shù)腎ncucyte® 實時活細(xì)胞分析系統(tǒng),，Incucyte® 也成為這篇NATURE的核心技術(shù),。
在設(shè)計AND邏輯門的CAR時，一個關(guān)鍵問題是如何避免出現(xiàn)自發(fā)二聚體,，降低腫瘤殺傷的特異性作用,。
首先，是對不同跨膜域的選擇,，考慮到如果用同樣的跨膜結(jié)構(gòu)域可能會產(chǎn)生二聚體,，所以應(yīng)盡量使用不同的跨膜結(jié)構(gòu)域,?；诖耍髡呤紫妊芯苛薃A,，BB,，AB，BA四種跨膜域組合（A為CD28TM,，B為CD8TM）,。
圖3：Incucyte® 實驗顯示,只有CD19-28TM-LAT+HER2-8TM-SLP-76（AB組合）顯示出了一定的AND作用，但是仍然殺傷了CD19單陽,。
為了進(jìn)一步降低同源二聚或者異源二聚的可能性,，突變了CD28TM上的一個半胱氨酸位點（2CA），但是仍然無法提高特異性,。
LAT和SLP-76不會結(jié)合,，為什么還是不行呢？作者進(jìn)一步研究了這個信號通路發(fā)現(xiàn),，下游的一個適配分子 GADS,，可能會同時和兩個CAR結(jié)合，所以依然會形成二聚體,。所以將兩個CAR上的GADS結(jié)合位點的敲除后,，特異性就提高了，真正獲得了AND效果,！
當(dāng)然作者也嘗試了其他抗原組合,，比如CD19和ROR1，這種LINK CAR依然有效！
當(dāng)然這種AND效果方法不只一個,，比如SynNotch,，但是相對于SynNotch，這篇文章的LINK顯示出更佳的特異性,。
這種CAR可以擴(kuò)大CAR-T細(xì)胞靶向的分子范圍,，并將使CAR-T能夠用于實體瘤和自身免疫等疾病和纖維化。此外,，這項工作表明,，細(xì)胞的內(nèi)部信號機(jī)制可以重新利用為表面受體，其可能為細(xì)胞工程開辟新的途徑,。
為什么越來越多的高分文章都使用了Incucyte® ,？
-參考文獻(xiàn)-
[1] Engineering CAR-T Cells for Next-Generation Cancer Therapy.Cancer cell,2020
[2] Co-opting signalling molecules enables logic-gated control of CAR T cells.nature,2023
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