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產(chǎn)品簡介   

NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液,。含有sodium orthovanadate，sodium fluoride,，EDTA,，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解,。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE,、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,，IP),、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等實驗。

產(chǎn)品信息

儲存條件

-25~-15℃保存,，有效期1年,。盡量避免反復(fù)凍融，建議分裝后使用,。

使用說明

(一) 細(xì)胞樣品

1. 融解NP-40裂解液,，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的最終濃度為1 mM,。

2. 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細(xì)胞1-2秒后,，細(xì)胞就會被裂解,。植物細(xì)胞宜在冰上裂解2-10分鐘。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成5×105-1×106個細(xì)胞/管,，然后再裂解,。因為大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,，相對比較容易裂解充分,。

3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘,，取上清,，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作,。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠,，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100萬動物細(xì)胞用100 μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清,，其蛋白濃度約為2-4 mg/ml，不同細(xì)胞有所不同,。

（二）組織樣品：

1. 把   切成細(xì)小的碎片,。

2. 融解NP-40裂解液，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。

3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液,。（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。）

4. 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。

5. 充分裂解后,，10000-14000 g離心3-5分鐘,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。

6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分,。

注意事項

1. 需自備PMSF(Cat#20104ES),，裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品,，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat#20201ES/20200ES）,。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度,。

3. WB實驗系列產(chǎn)品選購可參考WB實驗系列產(chǎn)品-選購指南,。

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

5. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,。