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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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10906通用型TOPO克隆試劑盒(兼容平末端/TA末端)
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 10906 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：297更新時間：2025-02-07 13:36:27
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品介紹
Hieff Clone® Universal Zero TOPO TA/Blunt Cloning Kit是利用新一代拓撲異構酶(Topoisomerase)高效快速連接DNA片段的原理進一步研發(fā)而成,，搭配高效的平末端化因子，兼容平末端產(chǎn)物及粘性末端產(chǎn)物的快速克隆,。與傳統(tǒng)的連接酶相比,，具有以下優(yōu)勢：1) 快速,，僅需5分鐘即可完成連接反應。2) 高效,，無自連現(xiàn)象,，陽性克隆率接近100%，無需設置藍白斑篩選,；3) 可連接長達5 kb目的產(chǎn)物,。
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 10906ES08 | 10906ES20 | 10906ES50 |
10906-A | 2× Hieff Clone® Universal TOPO Cloning Premix | 25 μL | 100 μL | 250 μL |
10906-B | 1 kb control insert (40 ng/μL) | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
10906-C | M13 Forward Primer(10 μM) | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
10906-D | M13 Reverse Primer(10 μM) | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年,。
使用說明
反應體系
組分 | 用量 |
2× Hieff Clone® Universal TOPO Cloning Premix | 5 μL |
插入片段* | 0.5-5 μL |
ddH2O | To 10 μL |
*PCR 產(chǎn)物不能磷酸化,。如擴增模板為質(zhì)粒，模板質(zhì)粒會在后續(xù)實驗中引起假陽性,，因此推薦PCR產(chǎn)物進行膠回收后連接,。0.1-1 kb片段投入量推薦20-50 ng，1-2 kb片段投入量推薦50-100 ng,，2-4 kb片段投入量推薦100-200 ng,，4-5 kb片段投入量推薦200-300 ng。
反應條件
混勻上述體系,，于室溫(20-37℃)反應5 min,。連接反應不可于冰上進行。室溫(20-37℃)下孵育時,，建議孵育時間不超過5 min,，如果PCR產(chǎn)物濃度較低或者片段較長，則可以適當延長孵育時間,，不宜超過15 min（推薦使用25℃,，PCR儀控溫）。
轉化
1）在冰上解凍克隆感受態(tài)細胞（如：DH5α Chemically Competent Cell,，Cat#11802ES）,。
2）取10 μL冷卻重組產(chǎn)物，加入到100 μL感受態(tài)細胞中,，輕彈管壁數(shù)下混勻,，在冰上放置25 min。
3）42℃熱激60 sec,，冰上孵育2 min,。
4）加入500 μL SOC或LB培養(yǎng)基，37℃,，200 rpm,，搖菌60 min。
5）5000 rpm離心4 min，棄上清至100 μL,，用剩余培養(yǎng)基重懸菌體,。用無菌涂布棒將菌液均勻涂抹在含有正確抗性的平板上。待菌液被培養(yǎng)基吸收后,，倒置平板,，于37℃過夜培養(yǎng)。
克隆鑒定
可選擇測序法或酶切法進行鑒定,。用無菌的槍頭或牙簽將單個菌落挑至菌落PCR Mix中混勻（如：2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye),，Cat#10157ES）,，加入引物直接進行PCR反應,。測序引物：
M13F ：GTAAAACGACGGCCAGT
M13R ：CAGGAAACAGCTATGAC
載體信息
注意事項
需自備的材料：
1）自備試劑（僅羅列部分）：
超級感受態(tài)：轉化效率＞108 cfu/μg,，如翌圣DH5α超級感受態(tài)細胞（Cat#11802ES）,。
高保真酶：2× Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)（Cat#10154ES）或其他等效產(chǎn)品,。
菌落PCR mix：2× Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)（Cat#10157ES）或其他等效產(chǎn)品,。
核酸染料：YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)（Cat#10202ES）或其他等效產(chǎn)品,。
2）自備儀器耗材（僅羅列部分）：PCR儀,，水平電泳槽,，切膠儀,，EP管等。
為了您的安全和健康,，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
