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產(chǎn)品簡介

Nuclear Yeast Two-Hybrid Library Construction Kit是一款用于構(gòu)建真核生物的全長核蛋白酵母雙雜交文庫的試劑盒,，本試劑盒含有三個改造的PGADT7-S序列載體,，分別命名為PGADT7-S1,、PGADT7-S2,、PGADT7-S3, 三個載體含有不用的讀碼框閱讀方式，可以方便合成一份相同的雙鏈cDNA構(gòu)建三框文庫,。且改造的PGADT7-S序列載體多克隆上游含有NLS信號序列,，可以把文庫全部轉(zhuǎn)錄本基因定位到核內(nèi)。本產(chǎn)品適用于起始模板為100 ng-100 μg不同來源真核生物總RNA樣本,。經(jīng)過mRNA分離,、單鏈cDNA合成、雙鏈cDNA合成,、雙鏈cDNA分級純化,、小量連接轉(zhuǎn)化確定分級取舍、大量連接轉(zhuǎn)化,。

操作流程

圖1 核蛋白酵母雙雜交文庫構(gòu)建試劑盒流程原理圖

注意事項

1. 關(guān)于操作

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途,。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作,。

3. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍,。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用,。

4. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進行各步驟反應(yīng),，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近,。

5. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區(qū)域定期進行清理,，推薦使用固相RNA清除劑(翌圣貨號: 10609ES)去除RNA酶污染,。

6. PCR產(chǎn)物因操作不當極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進而影響實驗結(jié)果準確性,。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測區(qū)進行強制性的物理隔離,；配備文庫構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時對各實驗區(qū)域進行清潔（固相RNA清除劑(翌圣貨號: 10609ES)）,，以保證實驗環(huán)境的潔凈度,。

2. 應(yīng)用范圍

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

2. 本試劑盒適用于起始模板量為100 ng-75 μg（體積≤100 μL）的高質(zhì)量動物,、植物和真菌等真核生物的總RNA,。如初始RNA濃度偏低，體積超過100 μL,，可使用Hieff NGS® RNA Cleaner磁珠進行濃縮,。 RNA需通過Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片檢測，RIN值要求＞7,，以保證mRNA有完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu),。

3. 本試劑盒的mRNA分離模塊使用的是oligo (dT)磁珠，只有帶poly(A)尾的mRNA才能被提??；其他不具poly(A)尾的RNA，如非編碼RNA,、無poly(A)尾的mRNA等不能適用本試劑盒,。此外，F(xiàn)FPE樣本中的mRNA降解嚴重,，通常無完整的poly(A)尾結(jié)構(gòu),，故亦無法使用本試劑盒進行建庫。