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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
11803ESDH5α Fast Chemically Competent Cell F
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 11803ES 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：319更新時(shí)間：2025-02-07 13:36:29
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品采用DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到得感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化,，廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳，適用于藍(lán)白斑篩選,。DH5α細(xì)胞重組酶recA1和核酸內(nèi)切酶endA1基因缺失突變使其能保證克隆DNA的穩(wěn)定性,。F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，無(wú)需42℃熱激,，37℃孵育,，只需10 min即可完成一次轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),，轉(zhuǎn)化效率約達(dá)108 cfu/μg DNA,。
DH5α細(xì)胞基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 11803ES80 |
11803-A | F-DH5α 感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100 μL |
11803-B | pUC19 (control vector, 10 pg/μL) | 10 μL |
儲(chǔ)存條件
-85℃~-65℃保存，有效期6個(gè)月,。請(qǐng)勿將本品置于-20℃或液氮中保存,。
使用方法
快速轉(zhuǎn)化操作方法（10 min）
1）提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上,，待菌體融化,，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）,，輕輕彈勻,，冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,。
3）用200 μL移液槍將上一步的混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,，均勻涂布。
4）將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過(guò)夜培養(yǎng),。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,，平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h,。
快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法（25 min，可提高轉(zhuǎn)化效率）
1）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上,，待菌體融化,，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）,，輕輕彈勻,，冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一,。
2）42℃水浴熱激45 sec,，迅速插回冰上靜置2 min，此過(guò)程不要晃動(dòng),。加入700 μL不含抗生素的LB,，37℃，200 rpm復(fù)蘇10分鐘,，均勻涂板,。
3）將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過(guò)夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,，平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h,。
常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化操作方法
1）將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上，冰浴,、解凍（大約5 min）,。
2）立即向解凍后的感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕彈勻,，冰浴靜置25 min,。
*所加DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
3）42℃水浴中熱激45 sec,，然后快速將EP管轉(zhuǎn)移到冰上,，靜置2 min。
*此過(guò)程不要晃動(dòng),，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率,。
4）向離心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培養(yǎng)基，混勻后37℃,，200 rpm復(fù)蘇60 min,。
5）5,000 rpm離心1 min收集菌體，留取100 μL左右上清涂布至含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)板上,，37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。如進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，請(qǐng)將平板放 37℃培養(yǎng)至少15 h。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品不可反復(fù)凍融,，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 本產(chǎn)品在冰中解凍時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，感受態(tài)細(xì)胞剛化凍時(shí)轉(zhuǎn)化效率高,。
3. 加入質(zhì)粒應(yīng)輕柔操作。
4. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞既可以快速轉(zhuǎn)化也可以常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化,，對(duì)于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建,，為提高轉(zhuǎn)化效率，可采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化,。
5. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐抗性平板時(shí)效率較高,，若涂或其他抗生素平板，轉(zhuǎn)化效率下降（無(wú)孵育步驟,，等對(duì)菌體毒性較大）,。若要提高或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率，可增加孵育步驟,。
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
7. 本產(chǎn)品僅作科研用途,！
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