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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 4T |
---|---|---|---|
貨號 | 41209ES04 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
Hieff® Quick exosome isolation kit Plus (for Milk) 乳液外泌體快速抽提試劑盒Plus | 41209ES04 | 4 T | 955.00 |
41209ES20 | 20 T | 4255.00 |
產品描述
Exosome(外泌體)是由活細胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,,具有典型的脂質雙分子層結構;存在于細胞培養(yǎng)上清液,、血清,、血漿、唾液,、尿液,、羊水以及其它生物體液中;Exosome攜帶有多種蛋白質,、脂類、DNA和RNA等重要信息,,不僅在細胞與細胞間的物質和信息傳遞中起重要作用,,更有望成為多種疾病的早期診斷標志物,。
本試劑盒采用*的分離技術,可以快速從乳液中獲得大量完整的外泌體顆粒,,適用于下游的細胞共培養(yǎng),、電鏡分析、Western Blot,、熒光定量(qPCR)和高通量測序等應用,。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規(guī)格 | |
41209ES04 | 41209ES20 | ||
41209-A | Buffer-A | 10 mL | 50 mL |
41209-B | Buffer-B | 10 mL | 50 mL |
41209-C | Buffer-C | 10 mL | 50 mL |
41209-D | Buffer-D | 20 mL | 100 mL |
41209-E | 50 mL過濾柱 | 4個 | 20個 |
運輸和保存方法
室溫運輸,,本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個月,。
注意事項
1,、產品只針對乳液樣本,不適用其它血清/血液或者是細胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提;如果需要進行細胞上清外泌體分離,,請選用細胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒,。
2、如果想要進一步純化外泌體,,可以使用相應抗體包被的磁珠進行親和純化,。
3、為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
4、本產品僅作科研用途,!
操作方法
樣品預處理:
1,、收集新鮮的樣品,,置于冰上待用;若為凍存的樣品,,可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍,,待*融化后置于冰上待用。
2,、取25 mL(單次樣品最佳提取量為50 mL)乳液樣品轉移至離心管中,,4℃,10000×g離心20 min,,轉移分層樣品中的中層乳清至新的離心管中,。(離心后樣品分為三層,上層為脂質層,,中層為乳清層,,下層為蛋白層。脂質層應致密,、穩(wěn)定,,若脂質層松軟,不穩(wěn)定,,且蛋白層沉淀較多,,可重復此步驟。)
3,,向乳清中加入Buffer-A,,顛倒混勻離心管至呈現(xiàn)半透明狀,再加入Buffer-B,,顛倒混勻后2℃至8℃靜置10min,。(靜置結束后搖晃離心管,樣品應呈現(xiàn)白色固體和透明液體混合物,,若樣品仍為乳白色或是未呈現(xiàn)混合狀,,可以適當加入Buffer-A至液體透明。)
乳清體積 | Buffer-A | Buffer-B |
20 mL | 2 mL | 1.5 mL |
40 mL | 4 mL | 3 mL |
【注】:試劑用量可根據(jù)此表進行等比例換算,。
4,,將樣品于4℃,10000×g離心10 min,,收集上清液轉移至50 mL過濾柱中,,4℃,3000×g離心2min,。
5,,收集過濾后的上清液至新的離心管中,加入和Buffer-B等量的Buffer-C顛倒混勻,。
外泌體分離:
1,、向預處理后的樣品中,,按照下表加入Exosome isolation solution (其他樣品量根據(jù)表中試劑用量進行等比例變換)。
預處理樣品量 | Buffer-D |
20 mL | 5 mL |
40 mL | 10 mL |
【注】:試劑用量可根據(jù)此表進行等比例換算,。
2,、蓋緊離心管蓋,渦旋振蕩1 min,,放置于4℃冰箱靜置2 h,。
3、取出裝有混合液的離心管,,4℃,,10,000×g離心60 min,棄上清(盡可能吸凈上清液),,收集富含外泌體的沉淀,。
4、吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物,,待其充分懸浮于PBS后,,將懸液轉移至新的1.5 mL離心管中。
【注】加入1×PBS的量,,建議根據(jù)預處理樣本的體積決定,,預處理樣本體積:Exosome Buffer體積=40:1。
5,、將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃,12,000×g離心5 min,,棄沉淀,,保留上清液,該上清液即富含外泌體顆粒的溶液,。
【注】此時如果依然可以看到明顯的沉淀,,建議重復步驟5,多次離心至無明顯沉淀,。
6)外泌體的保存:純化后的外泌體可于4℃保存3天,,分裝后于-80℃ 長期保存,避免反復凍融,。
外泌體除菌(可選):
獲得的外泌體后期需要與細胞共培養(yǎng),,可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時,,外泌體濃度在10-100 μg/mL內做梯度摸索,,選擇一個較為合適的條件。
HB220107