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產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu),，存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、血清、血漿,、唾液,、尿液、羊水以及其它生物體液中,。Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì),、脂類、DNA和RNA等重要信息,，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用,，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物,。

本試劑盒采用*的分離技術(shù)，可以快速?gòu)难?/span>/血漿中獲得大量完整的外泌體顆粒,，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng),、電鏡分析,、Western Blot,、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存方法

室溫運(yùn)輸,，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個(gè)月,。

注意事項(xiàng)

使用前請(qǐng)將外泌體抽提試劑（41206-A）充分混勻。

2,、產(chǎn)品只針對(duì)血清/血漿樣本,，不適用其它體液或者是細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提；如果需要進(jìn)行細(xì)胞上清外泌體分離,，

請(qǐng)選用細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒,。

3、如果想要進(jìn)一步純化外泌體,，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進(jìn)行親和純化,。

4、為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

5、本產(chǎn)品僅作科研用途,！

操作方法

樣品預(yù)處理：

收集新鮮的樣品,，置于冰上待用；若為凍存的樣品,，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍,，待*融化后置于冰上待用。

取1 mL血清/血液樣品轉(zhuǎn)移至離心管中,，4℃,，3000×g離心10 min，棄沉淀,，并將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中,。

3、將轉(zhuǎn)移的上清,，4℃,，10,000×g離心20 min，棄沉淀,，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,。

外泌體分離：

1,、向預(yù)處理后的樣品中，加入4倍體積的1×PBS充分混勻,。

2,、在PBS稀釋后的樣品中，繼續(xù)加入相應(yīng)量的41206-A試劑,；蓋緊離心管蓋,，渦旋振蕩1 min，放置于4℃冰箱靜置2 h,。3,、取出裝有混合液的離心管，4℃,，10,000×g離心60 min,，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀,。

4,、吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后,，將懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中,。

【注】加入PBS的量，建議根據(jù)初始樣本的體積決定,，初始樣本體積：1×PBS體積=2.5:1,。

5、將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃,，12,000×g離心2 min,，棄沉淀，保留上清液,，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液,。

【注】此時(shí)如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復(fù)步驟4,，重新進(jìn)行洗滌和沉淀,。

外泌體純化

1）純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗制品轉(zhuǎn)入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃,，3000g離心10 min,，收集管底的液體，即為純化后的外泌體顆粒,。

2）外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天,，分裝后于-80℃ 長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng),，可以使用0.22 μm的濾器進(jìn)行過濾除菌,。初次嘗試時(shí)，外泌體濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索,，選擇一個(gè)較為合適的條件,。

HB220107