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RIPA Lysis Buffer (Medium)  RIPA裂解液（中）

產品信息

產品描述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液,，對動物細胞胞膜,、胞漿、胞核成分均有裂解作用,。根據其裂解液的強度不同,，大致可以分為強、中,、弱三類,。

本品屬于裂解強度居中的RIPA裂解液，含有sodium orthovanadate,，sodium fluoride,，EDTA，leupeptin等多種抑制劑,，可以有效抑制蛋白降解,。裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實驗。

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸,。

-20℃保存,，一年有效。盡量避免反復凍融,，建議分裝后使用,。

注意事項

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行,。

3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑,，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

使用說明：

(一) 細胞樣品

1）融解RIPA裂解液，混勻,。取適當量的裂解液,，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM,。

2）貼壁細胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗),。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,，使裂解液和細胞充分接觸,。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解,。

懸浮細胞：離心收集細胞,，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細胞,。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,，必需分裝成5×10⁵～1×10⁶個細胞/管,，然后再裂解。

3）充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作,。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）組織樣品：

1）把組織|剪切成細小的碎片,。

2）融解RIPA裂解液,，混勻。取適當量的裂解液,，在使用前數分鐘內加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM。

3）按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量,。)

4）用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。

5）充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。

6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈vortex使樣品裂解充分,。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得充分,。

【注】：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,，屬正常現象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物,。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果檢測一些常見的轉錄因子,，例如NF-kappaB,、p53等時，通常不必進行超聲處理,，就可以檢測到這些轉錄因子,。  

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