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20101ESRIPA裂解液（強）RIPA Lysis Buffer
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- 20101ES 產品型號
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- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：1478更新時間：2024-07-26 10:42:17
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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 20101ES |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè),制藥 |
產品介紹
RIPA裂解液（強）RIPA Lysis Buffer
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
RIPA裂解液（強）RIPA Lysis Buffer | 20101ES60 | 100ml | -20℃ | 230 |
產品描述
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,，是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液,，對動物細胞胞膜、胞漿,、胞核成分均有較強裂解作用,。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實驗,。
RIPA裂解液的主要成分為50mM Tris (pH 7.4),，150mM NaCl，1% Triton X-100,，1% sodium deoxycholate,，0.1% SDS，并含有sodium orthovanadate,，sodium fluoride,，EDTA，leupeptin等多種抑制劑,，可以有效抑制蛋白降解,。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。
-20℃保存,，一年有效,。盡量避免反復凍融，建議分裝后使用,。
注意事項
1）需自備PMSF,。
2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行,。
3）用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（YEASEN CAT NO.20201ES76）,。由于含有較高濃度的去垢劑,，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
4）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
使用說明：
(一) 培養(yǎng)細胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻,。取適當量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM,。
2. 貼壁細胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗),。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細胞充分接觸,。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解,。
懸浮細胞：離心收集細胞,，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細胞,。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,，必需分裝成50-100萬細胞/管,，然后再裂解。
3. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘,，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl或250μl,。
（二）組織樣品：
1. 把組織|剪切成細小的碎片,。
2. 融解RIPA裂解液，混勻,。取適當量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM,。
3. 按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液,。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品,，可以適當減少裂解液的用量,。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解,。
5. 充分裂解后,，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清,，即可進行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器,，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分,。
注：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗,；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB,、p53等時,，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子,。
