日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

碘化丙啶（Propidium Iodide,，PI）是一種常用的細(xì)胞核熒光染料,，作為一種溴化乙錠（EB）的類(lèi)似物，能夠嵌入堿基之間實(shí)現(xiàn)與DNA結(jié)合,。這種結(jié)合沒(méi)有或者幾乎無(wú)序列傾向性,，大約每4-5個(gè)DNA堿基對(duì)結(jié)合一個(gè)染料。PI也能與RNA結(jié)合,，需要用核酸酶處理來(lái)區(qū)分DNA和RNA染色,。水溶液中PI的zui大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)是493/636nm。一旦與核酸結(jié)合,，熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)20-30倍,，zui大激發(fā)波長(zhǎng)向紅色波段遷移~30-40nm，zui大發(fā)射波長(zhǎng)向藍(lán)色波段遷移~15nm,，從而使其zui大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)變?yōu)?/span>535/617nm,。PI的摩爾吸光系數(shù)相對(duì)比較低，但是其具有足夠大的斯托克司頻移來(lái)同時(shí)檢測(cè)核酸DNA和熒光標(biāo)記抗體,，只需要使恰當(dāng)?shù)臑V片,。PI適用于熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡,，流式細(xì)胞儀以及熒光計(jì)分析,。

PI不能穿透細(xì)胞膜而被排斥在活細(xì)胞外，但是可以穿過(guò)破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色,。利用這一特性,，通常與Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活細(xì)胞熒光探針一起使用,，同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色和鑒定,，用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的研究。也可以用作多重?zé)晒馊旧膹?fù)染劑,，兼容于各種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù),，包括直接或者間接的熒光抗體檢測(cè),，mRNA原位雜交，細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性的熒光探針檢測(cè)法以及組織染色,。PI的單獨(dú)染色也可以進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測(cè),。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸,。4 ºC避光保存,，至少一年穩(wěn)定。

使用方法

1. 儲(chǔ)存液的配制

稱(chēng)取1mg PI粉末（M. Wt= 668.4）,，用1ml去離子水充分溶解后配置成1mg/ml（1.5 mM）的儲(chǔ)存液,。4 ºC避光保存，至少6個(gè)月穩(wěn)定,。

1. 貼壁細(xì)胞復(fù)染步驟（熒光顯微鏡檢測(cè)）

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞,。PI染色一般在其它染色完成后再進(jìn)行。PI復(fù)染要求細(xì)胞經(jīng)透化處理,。
2. RNase酶處理：若樣本使用多聚甲醛,，甲醛或者戊二醛固定，則需要進(jìn)行RNase處理,。若樣本用甲醇/醋酸或者丙酮固定,，通常不需要此步操作。a,，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本,；b，將本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min,；c,，用2×SSC溶液清洗樣本3次，每次1min,。
3. 復(fù)染：a,，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡樣本；b,，直接用2X SSC稀釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲(chǔ)存液 1:3000,，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足夠用于一個(gè)蓋玻片細(xì)胞制片,。染色1-5min,。c，2×SSC清洗幾次,，流盡多余的緩沖液后,，加入抗淬滅劑封片（比如Yeasen，貨號(hào)：36308ES08）,。d,，選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。

1. 懸浮細(xì)胞復(fù)染步驟（流式細(xì)胞儀檢測(cè)）

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)自身樣本選擇合適的步驟固定細(xì)胞,?；蛘呤褂萌缦碌牟襟E：

• 收集一定量的細(xì)胞，密度約 2 × 10⁵ ~1 × 10⁶,。離心收集細(xì)胞,，吸掉上清液，用手輕彈管壁就剩下

的液體重懸細(xì)胞,。之后加入1ml常溫存放的PBS,；

• 將所有的重懸細(xì)胞轉(zhuǎn)移到4ml于-20ºC預(yù)冷的無(wú)水乙醇，在高速渦旋混勻的同時(shí)一邊用槍緩慢的添

加細(xì)胞懸液到乙醇內(nèi),。于-20ºC乙醇中固定5-15min,。

• 離心收集細(xì)胞，除去乙醇,。用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后,，加入5ml室溫的PBS。允許細(xì)胞水化15min,；

1. 復(fù)染

• 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl₂ , 0.5 mM MgCl₂ , 0.1% Nonidet^® P-40）稀

釋1mg/ml（1.5 mM）PI儲(chǔ)存液 1:500,，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足夠用于每個(gè)細(xì)胞樣本的檢測(cè),。注：工作液的使用濃度可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整,，也可以直接使用PBS，HBSS等緩沖液直接稀釋PI儲(chǔ)存液到需要的濃度,。

• 樣本制備的zui后一步后離心收集細(xì)胞,，去除上清，用手輕彈管壁以彈松細(xì)胞后,，加入1ml的PI染

色工作液,。室溫孵育15min后，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞分析,。若用流式顯微鏡觀察,，則需要離心樣本，去除上清并重懸細(xì)胞在新鮮的緩沖液中,。吸取1滴懸液到載玻片上,，蓋上蓋玻片后觀察,。

1. 染色質(zhì)FISH復(fù)染步驟

1. 樣本準(zhǔn)備：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)步驟制備樣本。復(fù)染之前的zui后一步用去離子水清洗樣本以去除玻片上殘留的緩沖鹽,。室溫晾干,。此步驟有助于減少非特異性的背景染色。
2. 復(fù)染

• 工作液的配制：用PBS緩沖液直接稀釋1 mg/ml（1.5 mM）的PI儲(chǔ)存液1:1000,，得到1.5 µM的

PI染色工作液,。滴加300µL的工作液直接到樣本。有必要的話,，工作液內(nèi)加入新鮮制備的RNase A（終濃度：10 µg/mL）,。可使用塑料蓋玻片均勻分布染液在載玻片上,。室溫避光條件下孵育樣本30 min,；如

果加入RNase則37ºC孵育。

1. 去除蓋玻片,，用PBS或去離子水清洗以除去沒(méi)有結(jié)合的染料,；
2. 用吸水紙巾圍繞著樣本周?chē)埩粢后w，蓋上玻璃蓋玻片后用石蠟或者指甲油封住蓋玻片邊緣,。也可用抗熒光淬滅劑進(jìn)行封片,。
3. 選擇熒光顯微鏡的合適濾片進(jìn)行觀察。

注意事項(xiàng)

1. 碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑,，因此PI溶液在丟棄之前需要先經(jīng)過(guò)活性炭處理,。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

相關(guān)產(chǎn)品