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關(guān)鍵詞：脂質(zhì)體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,，Lipo
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent
脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） | *（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 40802ES02 | 0.5ml | 4℃ | 738.00 | 488.00 |
40802ES03 | 1 ml | 4℃ | 1308.00 | 868.00 | |
40802ES08 | 5×1ml | 4℃ | 4878.00 | 3248.00 |
產(chǎn)品 | RMB/ml | RMB/反應(yīng)* |
Hieff TransTM | 868 | 1.7 |
Lipofectamine? 2000 | 3090-3700 | 6.2-7.4 |
Lipofectamine? 3000 | 3710-4447 | 6.3-8.9 |
FuGene? 6 | 4135 | 8.3 |
*以24孔板為例,，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品描述
Hieff TransTM脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑是一種多用途的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，適用于DNA,、RNA和寡核苷酸的轉(zhuǎn)染,，對(duì)大多數(shù)真核細(xì)胞具有很高的轉(zhuǎn)染效率。其*的配方使其可直接加入培養(yǎng)基中,，血清的存在不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率,，這樣可以減少去除血清對(duì)細(xì)胞的損傷。轉(zhuǎn)染后不需要除去核酸-Hieff TransTM復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基,，也可在4～6小時(shí)后除去,。
Hieff TransTM以無(wú)菌的液體形式提供，濃度為1mg/ml,。對(duì)于 24 孔板轉(zhuǎn)染,，每次用2μl左右，則1ml Hieff TransTM約可做500 次轉(zhuǎn)染,；對(duì)于6孔板,，每次用10μl左右,，則1ml Hieff TransTM約可做100 次轉(zhuǎn)染；
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸,。產(chǎn)品4oC保存,，一年有效。不可冷凍,！
Hieff Trans轉(zhuǎn)染實(shí)例
注意事項(xiàng)
1) Hieff TransTM要求細(xì)胞鋪板密度較高,，以90%-95%為佳，這有助于減少陽(yáng)離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性造成的影響,；如果你研究的基因要求比較長(zhǎng)的表達(dá)時(shí)間,，比如細(xì)胞周期相關(guān)基因，或者細(xì)胞表面蛋白,，選擇細(xì)胞鋪板密度要求較低的轉(zhuǎn)染試劑,，不適合用。
2) Hieff TransTM可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基,。但是，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成,。另外，要檢測(cè)所用的無(wú)血清培養(yǎng)基與的相容性,，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容,。
3) 轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素。
4) 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率,，質(zhì)粒中的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵,。
5) 陽(yáng)離子脂質(zhì)體應(yīng)該在4度保存，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開蓋,，因?yàn)榭赡軙?huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率,。
6) 初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到zui大的轉(zhuǎn)染效率。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例,，通常推薦是1:2-1:3,，比如24孔板內(nèi)接種0.5-2×105個(gè)細(xì)胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μl 轉(zhuǎn)染試劑,。通過(guò)調(diào)整DNA/Hieff TransTM比例優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率,，保證細(xì)胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5,。
操作流程（以24孔板為例,，其他培養(yǎng)板加樣體積請(qǐng)參考表一）
【注】：轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化*使用量。
貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天（20-24小時(shí)）,，胰酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù),，細(xì)胞鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）,。
懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天,，配制DNA復(fù)合物之前，24孔板中細(xì)胞鋪板,，每500μl生長(zhǎng)培養(yǎng)基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells,。
1. 按照以下體系配制DNA-Hieff TransTM復(fù)合物：
1）對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.5μg DNA,?；靹颉?/span>
2）對(duì)于每孔細(xì)胞,，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋1-2.5μl Hieff TransTM,。
Hieff TransTM稀釋后室溫孵育5min（在30min內(nèi)同稀釋的DNA 混合，保溫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)降低活性）,。
【注意】：即使使用OPTI-MEMⅠ稀釋,，細(xì)胞也可以使用DMEM 培養(yǎng)。如果DMEM 作為的稀釋液,，必須在5min內(nèi)同稀釋的DNA混合,。
2. 混合稀釋的DNA和稀釋的（總體積100μl），輕輕混勻,，并在室溫（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物形成,。此時(shí)溶液可能會(huì)混濁,，但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染。
【注意】：DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物室溫至少穩(wěn)定保存5h,。
3. 直接將100μl DNA-Hieff TransTM復(fù)合物加入到細(xì)胞培養(yǎng)板每個(gè)孔中,，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻,。
【注意】：如果在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染,，使用含血清的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞鋪板。在加入復(fù)合物前移去生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換為500μl無(wú)血清培養(yǎng)基,。
4. 37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48h,，直至進(jìn)行轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析,，無(wú)需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。然而,，可能有必要在4-6h后更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性,。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：轉(zhuǎn)染24h后，按照1：10或更高比例在細(xì)胞中加入新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)染48h后加入篩選培養(yǎng)基,。
懸浮細(xì)胞株：在細(xì)胞中加入DNA-Hieff TransTM復(fù)合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA,。對(duì)于Jurkat細(xì)胞,，PHA和PMA的終濃度分別為1μg/ml和50ng/ml，可以提高CMV啟動(dòng)子活性和基因表達(dá),。對(duì)于K562細(xì)胞,，只加入PMA足以提高啟動(dòng)子活性。
轉(zhuǎn)染體系的調(diào)整
對(duì)于不同的細(xì)胞培養(yǎng)板,，Hieff TransTM,、DNA、細(xì)胞和培養(yǎng)基的使用量會(huì)有所不同,，具體請(qǐng)參考下表（表一）,。對(duì)于96 孔板培養(yǎng)，不需要提前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板,，可以直接在平板中制備復(fù)合物,，然后將細(xì)胞懸浮液加入到復(fù)合物就可以了，這樣進(jìn)一步減少了轉(zhuǎn)染時(shí)間,。這種改進(jìn)步驟已經(jīng)過(guò)293-H,，293-F，COS-7L和CHO細(xì)胞的試驗(yàn),，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低,。快捷的步驟和蛋白表達(dá)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染使得非常適用于96 孔板的高通量轉(zhuǎn)染,，比如cDNA文庫(kù)的篩選和蛋白瞬時(shí)表達(dá),。
表一 在不同的培養(yǎng)容器中轉(zhuǎn)染，,，核酸,，細(xì)胞和培養(yǎng)基的用量
Culture vessel | Surf. area per well1 | Shared reagents | DNA transfection | RNAi transfection | |||
Vol. of plating medium | Vol. of dilution medium2 | DNA | RNA | ||||
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 2×25 μl | 0.1 μg | 0.2-0.5 μl | 5 pmol | 0.25 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 2×50 μl | 0.5 μg | 1-2.5 μl | 20 pmol | 1.0 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 μl | 1 μg | 2-4.5 μl | 40 pmol | 2.0 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 μl | 2-4 μg | 5-10 μl | 100 pmol | 5 μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 4-8 μg | 10-20 μl | 200 pmol | 10 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 12-24μg | 30-60 μl | 600 pmol | 30 μl |
1 不同廠商提供的細(xì)胞培養(yǎng)板表面積可能有所不同；
2 稀釋DNA或RNAi所用的培養(yǎng)基體積,。
【注】：該表使用量?jī)H供參考,，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值保持在1:0.5-1:5,。
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