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CD分子,，即白細(xì)胞分化抗原,，也稱分化簇（Cluster of Differentiation），廣泛分布于各種免疫細(xì)胞表面,，如B細(xì)胞,、T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和NK細(xì)胞等,，是不同譜系的白細(xì)胞在正常分化成熟的不同階段及活化過程中,，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記,。監(jiān)測不同CD抗原的表達(dá)譜使得基于細(xì)胞在不同免疫過程中的功能的細(xì)胞類型鑒定、分離和表型分型成為可能,。
表1.免疫分型的重要CD標(biāo)志物
常見CD分子生物學(xué)功能
CD3
是一種20-26 kDa的分子,，表達(dá)于所有成熟的T淋巴細(xì)胞（約占正常人外周血淋巴細(xì)胞的60-80%）、NK-T細(xì)胞和一些胸腺細(xì)胞,。CD3與T細(xì)胞受體α/β或γ/δ二聚體相關(guān)聯(lián),，還在抗原識別過程中參與T細(xì)胞的激活和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD3單抗被用于測定血液中成熟T細(xì)胞,。
CD4
也稱為T4,，是一種55kD的單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族,。CD4存在于大多數(shù)胸腺細(xì)胞,、T細(xì)胞的一個亞群、也低水平表達(dá)于單核/巨噬細(xì)胞,。CD4是免疫應(yīng)答中的共受體（通過與MHC II類分子結(jié)合發(fā)揮協(xié)同受體活性）,，同時也是HIV感染的主要受體（CD4是HIV-1表面糖蛋白gp120的主要受體）。CD4調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化,、參與T/B細(xì)胞的粘附,、T細(xì)胞的分化、T細(xì)胞選擇和信號轉(zhuǎn)導(dǎo),。
CD8a
是一種32-34kD的I型糖蛋白,。它與CD8b形成同源二聚體（CD8a/a）或異源二聚體（CD8a/b）。CD8,，也稱為T8和Leu2,，是免疫球蛋白超家族的成員，存在于大多數(shù)胸腺細(xì)胞,、外周血T細(xì)胞的一個亞群以及NK細(xì)胞上（幾乎全表達(dá)CD8a同源二聚體）,。CD8作為MHC I的共受體在抗原識別和T細(xì)胞活化中發(fā)揮作用，并在胸腺分化中扮演了重要角色,。CD8a中的兩個結(jié)構(gòu)域?qū)ζ涔δ芊浅Ｖ匾喊饨Y(jié)合MHC Iα3的IgSF結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)酪氨酸激酶p56 Lck的CXCP結(jié)構(gòu)域,。
CD28
是一種44 kD的二硫鍵連接的同源二聚體型I糖蛋白。它是免疫球蛋白超家族的成員,，也被稱為T44或Tp44,。CD28 在大多數(shù)T系細(xì)胞、NK細(xì)胞亞群和漿細(xì)胞上表達(dá),。CD28采用CDR3樣環(huán)中高度保守的MYPPY結(jié)構(gòu)同時結(jié)合CD80 和CD86,。CD28被認(rèn)為是一個主要的共刺激分子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的激活和IL-2合成，并防止細(xì)胞死亡,。體外研究表明,，CD28為抗原呈遞細(xì)胞的CD80和CD86上的配位提供了T細(xì)胞激活和增殖所需的共刺激信號。
CD19
是一種 95 kD 的 I 型跨膜糖蛋白,，也被稱為 B4,。它是免疫球蛋白超家族的成員，在 B 細(xì)胞（從前 B 細(xì)胞到成熟 B 細(xì)胞,，但在漿細(xì)胞上不存在）和濾泡樹突狀細(xì)胞上表達(dá),。CD19 參與 B 細(xì)胞的發(fā)育、激活和分化,。CD19 與 CD21（CR2）和 CD81（TAPA-1）形成復(fù)合物，并作為 BCR 共受體發(fā)揮作用,。
CD20
是一種 33-37 kD 的膜蛋白,，有四個跨膜區(qū)段，也被稱為 B1 和 Bp35,。CD20 在前 B 細(xì)胞,、靜止和活化的 B 細(xì)胞（不包括漿細(xì)胞）、一些濾泡樹突狀細(xì)胞以及 T 細(xì)胞亞群中低水平表達(dá),。CD20 在活化的 B 細(xì)胞和惡性 B 細(xì)胞中被大量磷酸化,。CD20 的同源寡聚體復(fù)合物被認(rèn)為形成 B 細(xì)胞質(zhì)膜的 Ca2+導(dǎo)電離子通道。CD20 分子參與 B 細(xì)胞的激活,，并與各種 Src 家族激酶（Lyn,、Lck、Fyn）相關(guān),。它與 MHC I 和 II 類,、CD53、CD81 和 CD82 形成復(fù)合物,。
CD抗原在免疫分型中被廣泛用作細(xì)胞標(biāo)志物,，可用于識別特定白細(xì)胞群和淋巴細(xì)胞亞群的存在和比例，并對其進(jìn)行分離,。流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)（IHC）是檢測和分析這些CD標(biāo)志物的常用檢測方法,。
流式抗體選擇注意事項(xiàng)
抗體的基礎(chǔ)信息
待測靶標(biāo)表達(dá)位置：胞膜表達(dá)或胞內(nèi)表達(dá)，靶標(biāo)表達(dá)位置不同,，染色方式也不同
靶標(biāo)標(biāo)為位置 | 染色方式 |
胞膜表達(dá)(CD3,、CD4、CD8等CD分子) | 無需固定和破膜 |
胞漿表達(dá)(IL系列 ,IFN-γ, TNF-α等) | 甲醛/皂素進(jìn)行固定和破膜處理 |
胞核表達(dá)(Foxp3等) | 甲醛/Triton法進(jìn)行固定和破膜處理 |
抗體反應(yīng)性需與樣品來源一致
抗體反應(yīng)性需與樣品來源一致
選擇明確標(biāo)注可用于流式實(shí)驗(yàn)的抗體,；
確定流式細(xì)胞儀的參數(shù)
激光器：提前了解使用的流式細(xì)胞儀的激光器配置,，常見的有紫色激光(405nm)、藍(lán)色激光(488nm)、紅色激光(635nm)等,；
濾光片：檢測通道的多少,，決定最多可以同時檢測幾個指標(biāo)。熒光素的發(fā)射波長與濾光片有關(guān),，所選擇熒光素要在儀器的可檢測范圍內(nèi),。
熒光素的選擇
抗原表達(dá)弱或分群不明顯，選擇強(qiáng)熒光,，如PE,、APC；
抗原表達(dá)強(qiáng)或分群明顯,，選擇弱熒光,，如FITC；
常用熒光強(qiáng)弱排序：PE-Cy5＞PE＞AF647＞APC＞PerCP＞Cy5.5＞FITC,。
同型對照抗體的選擇
選擇與一抗相同種屬來源,，相同免疫球蛋白亞型，相同熒光染料標(biāo)記的同型對照抗體,。如32102ES-FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(IgG2a), 同型對照選擇FITC Mouse IgG2a,。
產(chǎn)品數(shù)據(jù)展示
檢測樣本：人外周血淋巴細(xì)胞
檢測抗體：FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(紅色)
同型對照：FITC Mouse IgG2a(灰色)
人免疫細(xì)胞亞群流式抗體選購列表
亞群 | 抗原 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
T Cell (T淋巴細(xì)胞) | CD3 | 32101ES | Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb | 100 μg/1 mg |
32102ES | FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
32103ES | APC Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
32104ES | PE Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
CD4 | 32111ES | Purified Mouse Anti-Human CD4 mAb | 100 μg/1 mg | |
32112ES | FITC Mouse Anti-Human CD4 mAb | 25 T/100 T | ||
32113ES | APC Mouse Anti-Human CD4 mAb | 25 T/100 T | ||
32114ES | PE Mouse Anti-Human CD4 mAb | 25 T/100 T | ||
CD8a | 32121ES | Purified Mouse Anti-Human CD8a mAb | 100 μg/1 mg | |
32122ES | FITC Mouse Anti-Human CD8a mAb | 25 T/100 T | ||
32123ES | APC Mouse Anti-Human CD8a mAb | 25 T/100 T | ||
32124ES | PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD8a mAb | 25 T/100 T | ||
CD28 | 32131ES | Purified Mouse Anti-Human CD28 mAb | 100 μg/1 mg | |
32132ES | FITC Mouse Anti-Human CD28 mAb | 25 T/100 T | ||
32133ES | APC Mouse Anti-Human CD28 mAb | 25 T/100 T | ||
32134ES | PE Mouse Anti-Human CD28 mAb | 25 T/100 T | ||
B Cell (B淋巴細(xì)胞) | CD3 | 32101ES | Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb | 100 μg/1 mg |
32102ES | FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
32103ES | APC Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
32104ES | PE Mouse Anti-Human CD3 mAb | 25 T/100 T | ||
CD19 | 32141ES | Purified Mouse Anti-Human CD19 mAb | 100 μg/1 mg | |
32142ES | FITC Mouse Anti-Human CD19 mAb | 25 T/100 T | ||
32143ES | APC Mouse Anti-Human CD19 mAb | 25 T/100 T | ||
32144ES | PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD19 mAb | 25 T/100 T | ||
CD20 | 32151ES | Purified Mouse Anti-Human CD20 mAb | 100 μg/1 mg | |
32152ES | FITC Mouse Anti-Human CD20 mAb | 25 T/100 T | ||
32153ES | APC Mouse Anti-Human CD20 mAb | 25 T/100 T | ||
32124ES | PE Mouse Anti-Human CD20 mAb | 25 T/100 T |
