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新品│Endonuclease VIII：精準(zhǔn)切割DNA受損堿基,，助力基因損傷修復(fù)研究

2023-8-25　　閱讀(143)

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新品│Endonuclease VIII：精準(zhǔn)切割DNA受損堿基,，助力基因損傷修復(fù)研究

 

核酸內(nèi)切酶 Ⅷ(Endonuclease VIII, Endo Ⅷ)是一種具有N-糖基化酶活性(N-glycosylase)和AP-裂解酶(AP-lyase)活性的DNA損傷修復(fù)酶,，參與氧化產(chǎn)生的DNA損傷的堿基切除修復(fù),。

 

 

作用原理
Endonuclease VIII識(shí)別雙鏈DNA上受損堿基并在其N-糖基化酶活性作用下切除雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,，產(chǎn)生一個(gè)脫嘌呤(AP)位點(diǎn),。隨后，在其AP裂解酶活性作用下切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端,，產(chǎn)生一個(gè)具有3'和5'磷酸的堿基缺口,。

 

圖1. Endonuclease VIII反應(yīng)原理示意圖

 

 

翌圣Endonuclease Ⅷ

翌圣的Endonuclease Ⅷ（Cat#14536ES）由分子酶改造平臺(tái)——ZymeEditor™重組表達(dá)而來，高純度,，無核酸外切酶,、核酸內(nèi)切酶以及RNase殘留?？蓱?yīng)用于單細(xì)胞凝膠電泳,、NGS建庫中DNA損傷修復(fù),、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫,，搭配UDG(Cat#10303ES)進(jìn)行含U片段的克隆等,。

 

 

數(shù)據(jù)展示
01
受損堿基切除效果與進(jìn)口品牌一致
 
 
分別使用翌圣與進(jìn)口品牌N*的Endonuclease Ⅷ催化20 pmol寡聚核苷酸，20 µL反應(yīng)體系中加入5~40 U的Endonuclease Ⅷ 和相同酶活的UDG(Cat#10303ES),，37℃孵育1 h,。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣Endonuclease Ⅷ與進(jìn)口品牌N*的堿基切除效果一致,。

 

圖2. 受損堿基切除效果對(duì)比

 

02
無核酸外切酶,、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留
 
 
將10 U Endonuclease VIII分別與相應(yīng)的底物DNA/RNA在37℃孵育4 h,，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明,，Endonuclease VIII 無核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶,、RNase殘留,。

 

圖3. 核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶,、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果

 

 

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