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Smart-seq3xpress:更低成本,、更高通量的單細(xì)胞測序技術(shù)

2023-8-15  閱讀(362)

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單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序可以研究細(xì)胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄本的異質(zhì)性和復(fù)雜性,,揭示組織/器官/生物體內(nèi)不同細(xì)胞類型的組成和功能,,目前在胚胎發(fā)育,、細(xì)胞分化,、神經(jīng)科學(xué),、腫瘤免疫等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用?;赟MART(Switching mechanism at the 5′ end of the RNA template)技術(shù)的Smart-seq2是主要的單細(xì)胞測序技術(shù)之一,,具有高靈敏度、全長轉(zhuǎn)錄本覆蓋度,、可檢測到稀有轉(zhuǎn)錄本等特點(diǎn),,應(yīng)用場景廣泛。

 

圖1. Smart-seq2技術(shù)流程圖[1]

 

但基于平板的Smart-seq2技術(shù),,分析通量低且成本較高,,在一定程度上阻礙了其應(yīng)用為解決這一問題,,該技術(shù)的開發(fā)者瑞典卡羅林斯卡學(xué)院的Rickard團(tuán)隊(duì)改進(jìn)開發(fā)了Smart-seq3技術(shù)[2],,與Smart-seq2相比,Smart-seq3在逆轉(zhuǎn)錄過程中引入了分子編碼(UMI),,使轉(zhuǎn)錄本長度增加,,靈敏度進(jìn)一步提高,建庫成本降低十幾倍,。但仍然無法同時(shí)滿足高通量,、高基因檢出能力和低成本的需求,因此該團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步開發(fā)了Smart-seq3xpress[3],。

 

圖2. Smart-seq3xpress流程圖

 

與Smart-seq3相比,,Smart-seq3xpress在平板上由96孔板替換為384孔板,提升樣本通量,;在反應(yīng)體系上由標(biāo)準(zhǔn)10 μL縮小至1 μL,,減小反應(yīng)體系;在建庫流程上減少cDNA擴(kuò)增循環(huán)數(shù),、去除cDNA濃度定量,、片段長度質(zhì)控和投入量歸一化等步驟,簡化實(shí)驗(yàn)流程,。使測序成本在Smart-seq3基礎(chǔ)上進(jìn)一步降低3-4倍,,而且獲得的數(shù)據(jù)質(zhì)量高,能夠滿足高效和精細(xì)的細(xì)胞聚類要求,,適用于大規(guī)模細(xì)胞圖譜構(gòu)建,。

 

表1. Smart-seq2與Smart-seq3xpress比較

 

Smart-seq3xpress縮小反應(yīng)體系、簡化實(shí)驗(yàn)流程的同時(shí)要保證獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù),,就意味著對建庫的酶原料有著更高的性能要求,。翌圣基于自身的分子酶改造平臺(tái)——ZymeEditor™對Smart-seq技術(shù)的核心酶原料進(jìn)行性能改造及工藝優(yōu)化,并可規(guī)?;a(chǎn),,在保證優(yōu)異性能的同時(shí)進(jìn)一步降低實(shí)驗(yàn)成本,。

 

 

產(chǎn)品推薦

 

產(chǎn)品分類

產(chǎn)品特點(diǎn)

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號(hào)

逆轉(zhuǎn)錄酶

pg級(jí)靈敏度,快速逆轉(zhuǎn)錄,,高全長cDNA產(chǎn)量(20 kb),,末端轉(zhuǎn)移酶活性

Hifair® Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)

14604ES

RNase抑制劑

廣譜的RNase抑制活性,兼容各種逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶

UCF.ME® Swine RNase Inhibitor (40 U/μL)

14675ES

高保真DNA聚合酶

高保真度,,低GC偏好性,,的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性

Hieff Canace®II High-Fidelity DNA Polymerase

10140ES

轉(zhuǎn)座酶

片段化能力優(yōu)異,高建庫產(chǎn)量,,裸酶可搭配各測序平臺(tái)接頭

Tn5 Transposase (10 U/μL)

14524ES

Smart-seq2單細(xì)胞建庫試劑盒

全長cDNA合成,,Tn5建庫

Hieff NGS® Single Cell Low-Input cDNA Synthesis & Amplification Module

12500ES

Hieff NGS® C112P1 Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina® (for 1 ng)

13468ES

全長cDNA合成,酶切法建庫

Hieff NGS® Single Cell/Low Input RNA Library Prep Kit

12502ES

 

參考文獻(xiàn):

[1] Picelli S, Faridani OR, Bj?rklund AK, Winberg G, Sagasser S, Sandberg R. Full-length RNA-seq from single cells using Smart-seq2. Nat Protoc. 2014;9(1):171-181. 

[2] Hagemann-Jensen M, Ziegenhain C, Chen P, et al. Single-cell RNA counting at allele and isoform resolution using Smart-seq3. Nat Biotechnol. 2020;38(6):708-714. 

[3] Hagemann-Jensen M, Ziegenhain C, Sandberg R. Scalable single-cell RNA sequencing from full transcripts with Smart-seq3xpress. Nat Biotechnol. 2022;40(10):1452-1457. 



 


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