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TA克隆建庫(kù)技術(shù)是目前商業(yè)化建庫(kù)的主流方式,,通常需要片段化、末修加A,、接頭連接、PCR擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)流程,,操作復(fù)雜,,且建庫(kù)周期長(zhǎng)。與TA克隆建庫(kù)技術(shù)相比,,轉(zhuǎn)座酶法建庫(kù)在DNA片段化的同時(shí)給DNA片段加上測(cè)序接頭,,可替代TA克隆中的片段化、末修加A,、接頭連接步驟,,在后續(xù)建庫(kù)擴(kuò)增過程中,一步法PCR建庫(kù)就能獲得完整的用于測(cè)序的文庫(kù),,具有操作簡(jiǎn)便,、極大縮短建庫(kù)時(shí)長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。
圖1. 基于Tn5酶的建庫(kù)流程
Tn5酶作為轉(zhuǎn)座酶法建庫(kù)的核心酶原料,,在NGS領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛,,除了應(yīng)用于DNA建庫(kù)外,還可應(yīng)用于快速RNA建庫(kù),、ATAC,、CUT&Tag、單細(xì)胞測(cè)序等技術(shù),。(點(diǎn)擊查看詳情)
翌圣ZymeEditor™酶改造平臺(tái)精心打造轉(zhuǎn)座酶系列產(chǎn)品:Tn5 Transposase(Cat#14524ES),、pA-Tn5 Transposase(Cat#14528ES)、pG-Tn5 Transposase(Cat#14530ES)以滿足不同應(yīng)用需求,。
1,、5 U投入量無(wú)核酸外切酶殘留
圖2.pG-Tn5 Transposase核酸外切酶殘留檢測(cè)
2、相同酶投入量下,,片段化能力優(yōu)于其它品牌
圖3. pG-Tn5 Transposase片段化能力檢測(cè)
3,、應(yīng)用于CUT&Tag建庫(kù)產(chǎn)量更高
分別使用翌圣及品牌A相同酶量的pG-Tn5 Transposase對(duì)1000個(gè)細(xì)胞投入量樣本建庫(kù),,并對(duì)文庫(kù)測(cè)序后的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,,結(jié)果顯示翌圣pG-Tn5 Transposase文庫(kù)產(chǎn)量高于品牌A(圖4A),Mapping率相當(dāng)(圖4B); 染色質(zhì)上的信號(hào)分布情況與品牌A一致(圖5),。
圖4. pG-Tn5 Transposase應(yīng)用于CUT&Tag的文庫(kù)產(chǎn)量及Mapping率
圖5. pG-Tn5 Transposase應(yīng)用于CUT&Tag在染色質(zhì)上的信號(hào)分布
應(yīng)用 | 定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)ATAC建庫(kù)
| Tn5單酶 | Tn5 Transposase | 14524ES |
建庫(kù)試劑盒 | Hieff NGS® Fast Tagment DNA Library Prep Kit for Illumina®(for 50 ng) | 12207ES | |
CUT&Tag建庫(kù)
| pA-Tn5單酶 | pA-Tn5 Transposase | 14528ES |
pG-Tn5單酶 | pG-Tn5 Transposase | 14530ES | |
建庫(kù)試劑盒 | Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina | 12598ES |
翌圣ZymeEditor™
酶改造定制服務(wù)
翌圣ZymeEditor™是一個(gè)酶改造底層技術(shù)平臺(tái),,它基于翌圣生物多年在分子酶改造領(lǐng)域中的技術(shù)積累與知識(shí)拓展,該平臺(tái)已具備對(duì)多種酶的多種需求進(jìn)行定向改造的能力,。因此,,ZymeEditor™平臺(tái)從2023年開始正式推出酶改造對(duì)外定制服務(wù),可為各種應(yīng)用領(lǐng)域(如醫(yī)藥,、診斷,、食品、化工等)的客戶提供全套酶改造服務(wù),,也可以單獨(dú)提供蛋白發(fā)酵及純化工藝開發(fā)優(yōu)化,、規(guī)模化生產(chǎn)服務(wù),,以滿足不同客戶的需求,,助力產(chǎn)業(yè)升級(jí)。
圖6.ZymeEditor™酶改造定制服務(wù)流程