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NC膜,、PVDF膜、尼龍膜的應(yīng)用及差別

硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,，簡稱NC膜),，NC膜在Northern Blot、Southern Blot,、Western Blot中都需要用到,，雜交技術(shù)有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術(shù)目前較為常用,，先將待測核酸結(jié)合到一定的固相支持物上,，再與液相中的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜,。

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物,。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小,，隨著膜孔徑的不斷減小,，膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜,，小于20000的蛋白選用0.2um的膜,。PVDF膜使用是需預(yù)處理，用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團(tuán),，使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合,。PVDF膜具有較高的機(jī)械強(qiáng)度，是印跡法中的理想固相支持物材料,。

尼龍膜是一種合成的長鏈聚酰胺薄膜,，對核酸和蛋白質(zhì)具有很強(qiáng)的結(jié)合能力，能代替硝酸纖維素薄膜用于分子印跡和雜交實(shí)驗(yàn),。

   NC膜,、PVDF膜、尼龍膜的差別：尼龍膜是較理想的核酸固相支持物，有多種類型,；硝酸纖維素膜是目前應(yīng)用zui廣的一種固相支持物,，價格*；PVDF膜介于二者之間,。
    1.就結(jié)合能力而言：尼龍膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)480－600μg/cm2,，可結(jié)合短至10bp的核酸片段；硝酸纖維素膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)80－100μg/cm2,，對于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強(qiáng),；PVDF膜結(jié)合DNA和RNA能力可達(dá)125－300μg/cm2。
    2.就溫度適應(yīng)性而言：尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,，核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合,；硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA，結(jié)合不牢固,；PVDF膜結(jié)合牢固,，耐高溫，特別適合于蛋白印跡,。
就韌性而言：尼龍膜較強(qiáng),；硝酸纖維素膜較脆，易破碎,；PVDF膜較強(qiáng),。
    3.就重復(fù)性而言：⑴、尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,，雜交后,，探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來；硝酸纖維素膜不能重復(fù)使用,；PVDF膜可以重復(fù)使用,。

⑵、NC膜的使用也很簡便,，比如不需要甲醛預(yù)處理,，只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了,；比如NC膜很容易封閉,，也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,，不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,，又容易卷，操作要小心,，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途,。因?yàn)榻?jīng)不起多次“折磨”,。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜,，小于20KD的話建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話選擇0.1um的膜,。另外還要注意選擇純的NC膜混有含醋酸纖維(CM)的NC膜結(jié)合力會有所降低,。

⑶、由于NC膜上結(jié)合的蛋白會因?yàn)橐恍┤ノ蹌┒淮?，因此在封閉時使用較溫和的Tween20,，而且濃度不要超過0.3%(據(jù)說0.05%效果)。一般而言,，NC膜越純,，其蛋白結(jié)合能力就越高，所以要增加WB的靈敏度和分辨率,，提高所使用膜的純度是個可以考慮的選擇,。如果NC膜攙雜一些醋化纖維素這在前面已經(jīng)提到，會影響蛋白質(zhì)結(jié)合

⑷,、與硝酸纖維素膜相比,，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力，機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都更*的性能,。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2(而結(jié)合強(qiáng)度PVDF比硝纖膜強(qiáng)6倍,！)。但是PVDF膜zui大的優(yōu)點(diǎn)不僅于此：更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇,；而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,，特別是需要做N端蛋白測序，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,，當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,，所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。但不適合熒光,。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,，才能用。