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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | LD-Ab5808 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書
一,、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量
檢測血清的效價。
二,、適用范圍
定量檢測動物血清的效價,。
三,、所需材料
儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、均質(zhì)器、振蕩器,、離心機(jī),、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）
微量移液器：單道 1µL～10 µL,、10 µL～100µL
多道 50µL～300µL
試劑：去離子水
小鼠抗血清ELISA效價測定檢測試劑盒說明書
五,、 試劑盒組成
序號 | 組成部分 | 96T裝量 |
1 | 酶標(biāo)板自備 | 12×8孔 |
2 | 酶標(biāo)物 | 13 mL |
3 | 底物液A液 | 7 mL |
4 | 底物液B液 | 7 mL |
5 | 終 止 液 | 7 mL |
6 | 20×濃縮洗滌液 | 40 mL |
7 | 血清稀釋液 | 40 mL |
六、溶液配制
配液: 洗滌工作液
用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋,，用于酶標(biāo)板的洗滌,，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫,。
七,、樣本前處理
樣本處理前須知：
① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭,，吸取不同試劑時要更換吸頭,。
② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。
血清（稀釋倍數(shù)：1000,、2000,、5000、10000）
① 取血清按以上稀釋倍數(shù)依次稀釋1000,、2000,、5000、10000倍混勻,；
② 取100μL用于分析,。
八,、 酶標(biāo)免疫測定程序
① 將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,，待其*回升至室溫后方可使用，根據(jù)體積大小不同取出回溫的時間從1小時~2小時,。注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。
② 按標(biāo)血清稀釋液和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
③ 加血清稀釋液/血清：加血清稀釋液/血清100µL 到對應(yīng)的微孔中,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
④ 洗板：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干,，
加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s,，甩去孔內(nèi)液體,，重復(fù)洗滌3次，最后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
⑤ 加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100 µL/孔,，輕輕振蕩混勻,，用蓋板膜蓋板后置37℃避光孵育30 min。
⑥ .甩干孔內(nèi)液體,，重復(fù)洗板3次,，最后一次用吸水紙拍干。
⑦ 顯色：加入底物液A液50 µL/孔,，再加底物
液B液50 µL/孔,，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min,。
⑧ 測定：加入終止液50µL/孔,，用酶標(biāo)儀立即 測定450/630nm處的吸光度值。
九,、 結(jié)果判定
以OD值≥1.0為標(biāo)準(zhǔn),。
血清稀釋倍數(shù)≤2000倍OD值≥1.0的判斷為低效價，血清稀釋倍數(shù)在2000~5000倍OD值≥1.0的為中等效價,，血清稀釋倍數(shù)在≥5000倍OD值≥1.0的為高等效價（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件,，以便進(jìn)行大量樣本的分析計算。）
十,、 注意事項
① 根據(jù)體積大小不同取出回溫的時間從1小時~3 小時,，體積15毫升以上的優(yōu)先從冷藏環(huán)境取出 回溫。
② 洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。
③ 反應(yīng)終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚。
④不使用過了有效期的試劑盒,，不交換使用不同批號的試劑,。
⑤ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì),。
⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,，一般顯色時間為10min即可。若顏色較淺,，可延長反應(yīng)時間到15-20min,，反之則減短反應(yīng)時間。
⑦ 底物液B液長期使用變?yōu)闇\藍(lán)色時,，請放心使用,，不影響檢測結(jié)果。
⑧ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務(wù)部,。
十一,、貯藏條件及保存期
貯藏條件： 2～8℃
保 質(zhì) 期： 12個月
十二、問題與對策
（見下頁）
序號 | 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方法 |
1 | 板條不顯色或者無相應(yīng)數(shù)值 | 試劑使用順序混亂，或操作步驟出錯 | 嚴(yán)格遵循實驗說明重復(fù)實驗 |
使用了不同批次的試劑 | 確保試劑來自同一試劑盒 | ||
板條受潮嚴(yán)重 | 板條要封好,，干燥劑失效要及時更換 | ||
2 |
低 吸 光 度
OD 值
| 試劑過期,，或者不同的批次混用 | 查證過期試劑和批次 |
洗液配制錯誤、洗滌浸泡時間過長 | 按照說明書要求洗滌,，并正確配制洗液 | ||
孵育時間過短 | 按照說明書要求,，嚴(yán)格計算好時間 | ||
試劑污染 | 確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿 | ||
試劑溫度過低 | 根據(jù)試劑體積大小回溫時間相應(yīng)延長，確保試劑*回溫 | ||
使用錯誤波長讀數(shù),，或者酶 標(biāo)儀失靈 | 確保450nm波長讀數(shù),，檢查酶標(biāo)儀是否故障 | ||
試劑盒處于的條件 | 使用完畢的部分請立即放回冰箱，勿置于過熱環(huán)境時間太長 | ||
3 | 過高的 背景值或吸光度值 | 使用了質(zhì)量差的水配制試劑 | 使用雙蒸水或去離子水配制試劑 |
洗滌不當(dāng)或者洗板機(jī)洗板效果不好 | 增加1-2次洗滌,，每孔至少加入250μL洗液 | ||
酶標(biāo)儀失靈,，如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺 | 使用校正微孔板檢查酶標(biāo)儀，檢查光源 | ||
實驗室溫度過高,，反應(yīng)時間過長 | 測定操作溫度是否合適,，時間是否計算正確 | ||
試劑混淆，被污染或者配制不當(dāng) | 確保使用正確的試劑,，準(zhǔn)確配制,，避免污染 | ||
4
| 板 內(nèi) 差異性 大 | 加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品等的時間不一致 | 使用多道槍加樣，同種試劑加樣途中不能中斷 |
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍,，檢查吸嘴是否套緊,，確保吸液量一致 | ||
洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障 | 檢查洗滌系統(tǒng)，保持良好運行 | ||
5 | 板 間 差 異 性 大
| 板與板之間孵育時間相差太大 | 獨立計時,，確保一致的孵育時間 |
板與板之間不一致的洗滌過程 | 確保相同的洗滌次數(shù),，保證洗滌系統(tǒng)正常運作 | ||
使用移液槍不當(dāng) | 檢查移液槍，確保吸取相同液量 | ||
試劑和樣品處于不同溫度 | 確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫,，如果試劑體積較大則需要回溫較長時間,。不能用溫水浴回溫樣品 | ||
不同批次的試劑混用，或試劑盒過期 | 試劑不要混用,，通常0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降 | ||
6 | 一個或多個標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)點超出曲線范圍 | 標(biāo)準(zhǔn)品添加順序混亂,，或者放置于錯誤位置 | 按照說明要求重復(fù)實驗,，保證標(biāo)準(zhǔn)品添加正確,。 |
標(biāo)準(zhǔn)品被污染或與其他標(biāo)準(zhǔn)品混淆 | 改用新的標(biāo)準(zhǔn)品，按照由低濃度到高濃度的順序添加標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
洗滌不一致或者洗滌系統(tǒng)失靈 | 遵循一如既往的洗滌方式,，檢查洗滌系統(tǒng) | ||
加入標(biāo)準(zhǔn)品和試劑的時間不一致 | 由低到高濃度依次添加標(biāo)準(zhǔn)品,，使用多道槍移液 | ||
多道槍使用不當(dāng) | 校準(zhǔn)多道槍，檢查吸嘴是否套緊,，確保吸液量一致 |
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