1,、
黃曲霉毒素免疫親和柱的適用范圍:
適合于陳皮,、胖大海、僵蠶,、酸棗仁,、桃仁等中藥材品種。*執(zhí)行2010版中國藥典附錄IXV黃曲霉毒素測定法進行檢測,。
2,、黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟:
取供試品粉末約15.0g(過二號篩),精密稱定,,加入氯化鈉3.0g,置于均質(zhì)瓶中,,精密加入70%甲醇溶液75.0mL,,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11,000轉(zhuǎn)/分),離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分),,定性濾紙過濾,、然后精密量取上清液15.0mL,置50ml量瓶中,,用水稀釋至刻度,,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,,量取續(xù)濾液20.0mL,,待凈化。
混合對照品溶液的制備:精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品(黃曲霉毒素B1,、B2,、G1、G2標(biāo)示濃度分別為1.0μg/ml,、0.3μg/ml,、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,,置10ml量瓶中,,用甲醇稀釋至刻度,作為儲備液,。
3,、黃曲霉毒素免疫親和柱的凈化步驟:
1)回溫解凍:提前半個小時將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍;
2)上樣:準(zhǔn)確移取20mL提取好的樣品溶液注入免疫親和柱,,使溶液以1滴/S的速度通過免疫親和柱,,直至2mL-3mL空氣通過柱體,棄去流出液,;
3)淋洗:用20mL水淋洗免疫親和柱,,流速為1滴/s--2滴/s,,淋洗兩次。直至空氣進入免疫親和柱,,直至2mL-3mL空氣通過柱體,,棄去全部的流出液,抽干小柱,;
4)洗脫:準(zhǔn)確加入1.0mL甲醇洗脫,,流速約為1滴/s,收集全部的洗脫液于干凈的離心管中,,用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL,,供液相色譜測定。
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