液相色譜儀也叫高壓液相色譜,、高速液相色譜、高分離度液相色譜等,,它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上,,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,,小顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,,需用高壓輸送流動相,,故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜,。
由于
液相色譜分析技術(shù)涉及的樣品種類繁多,、樣品組成及其濃度復(fù)雜,樣品物理形態(tài)多變,,對液相色譜儀的正常分析測定造成一些干擾因素,,如果不注意儀器的維護(hù)和保養(yǎng),會對日常的分析測定帶采不便,,所以需要對儀器的使用以及維護(hù)要做一些了解才能熟練掌握這種分析技術(shù),。
液相色譜儀的操作過程:
1.翻開HPLC工作站(包含計算機軟件和色譜儀),,銜接好活動相管道,銜接檢測體系,。
2.對抽濾后的活動相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘,。
3.過濾活動相,根據(jù)需求挑選不一樣的濾膜,。
4進(jìn)入HPLC操控界面主菜單,,manual,進(jìn)入手動菜單,。
5.有一段時刻沒用,,或許換了新的活動相,需求先沖刷泵和進(jìn)樣閥,。沖刷泵,,直接在泵的出水口,用針頭抽取,。沖刷進(jìn)樣閥,,需求在manual菜單下,先purge,,再start,,沖刷時速度不要超越10ml/min。
6.調(diào)理流量,,初度運用新的活動相,,能夠先試一下壓力,流速越大,,壓力越大,,通常不要超越2000。injure,,選用適宜的流速,,on,走基線,,調(diào)查基線的狀況,。
7.規(guī)劃走樣辦法。file,,選擇select?users?and?methods,,能夠選擇現(xiàn)有的各種走樣辦法。若需樹立一個新的辦法,,new?method,。選擇需求的配件,包含進(jìn)樣閥,泵,,檢測器等,,根據(jù)需求而不一樣。選完后,,protocol,。一個完整的走樣辦法需求包含:a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流,通常2-5分鐘,;b.基線歸零,;c.進(jìn)樣閥的loading-inject變換;d.走樣時刻,,隨不一樣的樣品而不一樣,。
8.進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣辦法,,start,。進(jìn)樣,一切的樣品均需過濾,。辦法走完后,,postrun,可記載數(shù)據(jù)和做符號等,。悉數(shù)樣品走完后,,再用上面的辦法走一段基線,洗掉剩余物,。
9.關(guān)機時,,先關(guān)計算機,再關(guān)液相色譜儀,。
液相色譜儀操作注意事項:
1,、液相色譜儀的流動相應(yīng)采用色譜純?nèi)軇詽M足要求,、避免損壞色譜柱
2,、待分析的樣品必須溶解澄清、過濾,,以避免堵塞,、損壞色譜柱;
3、液相色譜儀流動相需經(jīng)過濾,、除氣后方可使用;
4、嚴(yán)禁使用有污染的水等沖洗色譜柱,,避免將互不相溶的溶劑一同進(jìn)入泵內(nèi);
5,、液相色譜儀分析完成后,須注意及時清洗色譜柱和檢測器的比色池。