一、簡介
蛋白質(zhì)的測定方法,，目前仍以1883年凱達爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ),，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實，通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量,，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外,，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機及無機態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量,，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%,，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K,，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實際含氮量有區(qū)別,，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆,、蠶豆,、大麥、小麥,、燕麥,、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7,，蕎麥,、葵花籽、亞麻籽,、麻籽,、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50,，玉米,、菜籽為6.00，水稻為5.95,，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25,。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法,。因此,，迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準(zhǔn)確,、穩(wěn)定,。
山東盛泰儀有限公司生產(chǎn)的全自動定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀），是引進消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù),，結(jié)合我國國情,，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置,。為糧食,、食品、飼料,、農(nóng)業(yè),、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。
二,、操作方法 山東盛泰儀器有限公司廠家直供
1.試劑制備
A.硫酸(比重1.84)
B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中
C.2%H3BO3
D.0.1NHCL
E. 催化劑:硒+無水硫酸鈉(1:1000)或硫酸銅等
F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)
2.樣品消化
稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸,。 將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi)，然后置于消化爐上,，然后開啟抽氣三通上自來水,，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài),，接通電源，在加熱初始階段防止樣品飛濺,。（選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右,，15分鐘左右后可滿電壓工作），（選用數(shù)顯型消化爐起先控制在200度左右,，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度）,。
3．蒸餾（結(jié)構(gòu)圖上有Δ標(biāo)記工作必需做）
（ST-O4A為例）蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入,，機器側(cè)面標(biāo)簽NaOH,、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時按面板上相應(yīng)開關(guān),，液體由泵吸入消化管內(nèi),，注入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。（一般堿液加量是消化時硫酸用量5倍以上,，加蒸餾水量15毫升左右）
1．打開電源,，打開自來水，接冷卻水自來水不必開過大,，出水口有水流出即可,，用排水管子上夾子夾緊排水管子。
開面板上右邊蒸氣開關(guān)手柄往上推為開蒸氣,，同時把左邊進水開關(guān)手柄往上推為開,，待電流表指針指在1A—2A時如果水進入側(cè)面蒸發(fā)爐慢，電流表長時間沒反應(yīng),，請用吸合球往正面的細長管內(nèi)吹幾下以排除管內(nèi)空氣，看示意圖指示馬上關(guān)把左邊進水開關(guān)手柄往下壓,，壓到底壓不下為關(guān)（盡量不要關(guān)太慢,，防止電流過大而燒壞15A保險絲），待蒸氣管噴出氣后又上推打開左進水開關(guān)供水,，2分鐘左右后電流穩(wěn)定在3.5A-6A左右后,，關(guān)閉右蒸氣開關(guān)手柄往下壓到底，壓不下為關(guān),。因為紅色進水開關(guān)是控制機器內(nèi)部產(chǎn)生蒸氣的水源開關(guān),，從側(cè)面的有機玻璃窗口內(nèi)可以看到蒸發(fā)爐水位的高低，防止水位過高,，因為一開始水沒有沸騰,，水不斷進入，容易使電流過大而燒壞保險絲,。蒸氣開關(guān)是起通斷蒸氣作用,，也是水源進入蒸發(fā)爐和排除蒸發(fā)爐水（實驗結(jié)束時）的排水器件,。（如果蒸氣出來后電流不大請開關(guān)一下紅色蒸氣開關(guān)會正常。（上推為開,，下壓為關(guān)））
2．在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑,，蒸餾時間設(shè)定6-8分鐘，并使接收瓶托架盤往上移,，使滴管浸沒在液體中,，然后按時控開關(guān)（也可不用開）。
3．向上扳動側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上,，然后按面板上開關(guān)分別加入H2O,、NaOH 液體，然后上推蒸氣開關(guān),，向試管內(nèi)注入蒸氣,，進行蒸餾樣品，在接收瓶內(nèi)接收液達150mL左右時移下接收瓶,，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘,，然后取下接收瓶，待滴定用,，關(guān)蒸氣開關(guān),。第二個樣品只要放上后，加好液,，上推蒸氣開關(guān)既可,，不要關(guān)電源。
4．滴定.
用0.1NHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液,，滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止,，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計算蛋白含量：
蛋白含量（%）=（V-V0）N 0.014 A 100
————————————
W
式中：V----消耗HCL的毫升數(shù)
V0-----空白實驗時消耗HCL的毫升數(shù)
N----- HCL的當(dāng)量濃度
0.014----1ml HCL的克當(dāng)量數(shù)
A---固定系數(shù)（6.25,、5.7,、5.3等）
W----試樣重量g （空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定）
4、關(guān)機
關(guān)電源,、關(guān)水,、打開排水夾子，兩紅球開光上推,，取下消化管,，擦干凈機器。
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