白介素8受體（可溶性）ELISA KIT

白介素8受體（可溶性）ELISA KIT介紹

白介素 8（IL-8）,，又稱趨化因子 CXCL8,，是一種由單核 - 巨噬細胞、上皮細胞等分泌的細胞因子,，分子量約 8kd,。多種細胞在 LPS、TNF 或 IL-1 刺激下均可產(chǎn)生 IL-8 ,。IL-8 通過結(jié)合趨化因子受體白細胞介素 - 8 受體 α（IL8-Rα,，CXCR1）和白細胞介素 - 8 受體 β（IL-8Rβ，CXCR2）,，對中性粒細胞發(fā)揮趨化和激活作用,，參與中性粒細胞介導的組織損傷，調(diào)節(jié)炎癥反應 ,。在自身免疫性疾病,、慢性炎癥性疾病等病癥中，IL-8 產(chǎn)生異常,，因此定量檢測 IL-8 對于研究疾病發(fā)生發(fā)展及指導治療意義重大 ,。而白介素 8 受體（可溶性）ELISA KIT 正是用于精準檢測相關(guān)樣本中可溶性白介素 8 受體含量的工具 。

一,、檢測原理

二,、試劑盒組成

1. 酶聯(lián)板：已預包被抗人白介素 8 受體（可溶性）抗體,，一般為 96 孔或 48 孔，用于承載樣本和試劑反應 ,。

2. 標準品：通常為凍干品,，有 2 瓶 。臨用前需用樣品稀釋液溶解并稀釋至特定濃度（如高濃度標準品可能為 1600pg/mL）,，再進行系列倍比稀釋,，得到不同濃度梯度的標準品溶液，如 800pg/mL,、400pg/mL,、200pg/mL、100pg/mL,、50pg/mL,、25pg/mL 等，用于繪制標準曲線 ,。

3. 樣品稀釋液：用于稀釋標準品以及稀釋濃度過高的待測樣本,，一般為 1×20mL 裝 。

4. 生wu素標記抗體：與可溶性白介素 8 受體特異性結(jié)合,，為濃縮液,，使用時需用生wu素標記抗體稀釋液按比例稀釋，一般為 1×120μL / 瓶（1：100） ,。

5. 生wu素標記抗體稀釋液：1×10mL 裝，用于稀釋生wu素標記抗體 ,。

6. HRP 偶聯(lián)的親和素：與生wu素標記抗體結(jié)合,，形成完整的檢測體系，為濃縮液,，使用時需用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液按比例稀釋,，一般為 1×120μL / 瓶（1：100） 。

7. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液：1×10mL 裝,，用于稀釋 HRP 偶聯(lián)的親和素 ,。

8. 底物溶液（TMB）：1×10mL 裝,，與 HRP 發(fā)生顯色反應，在 HRP 催化下 TMB 由無色變?yōu)樗{色 ,。

9. 濃洗滌液：1×20mL 裝,，使用時需用蒸餾水或去離子水按一定比例（如 1：25）稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板,，去除未結(jié)合的物質(zhì),，降低背景干擾 。

10. 終止液：1×10mL 裝,，一般為 2N 的硫酸溶液,，用于終止顯色反應，使藍色反應液轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色 ,。

11. 覆膜：多為 5 張,，用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 ,。

12. 使用說明書：1 份,，詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項,、性能指標等 ,。

三、樣本要求

1. 血清：采集全血后,，室溫放置 2 小時或 4°C 過夜,，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，小心吸取上清液用于檢測 ,。收集血液應使用一次性無熱原,、無內(nèi)毒素的試管 。

2. 血漿：可選用乙二胺四乙酸（EDTA）或肝素作為抗凝劑 ,。標本采集后,，需在 30 分鐘內(nèi)于 2 - 8°C 以 1000×g 離心 15 分鐘，取上清備用 ,。

3. 組織勻漿：先用預冷的磷酸鹽緩沖液（PBS,，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織,，che底去除殘留血液（因勻漿中裂解的紅細胞會干擾測量） 。稱取適量組織并剪碎,，按照約 1：9 的重量體積比（如 1g 組織對應 9mL PBS,，可按需調(diào)整并記錄），將剪碎組織與 PBS 加入玻璃勻漿器,，在冰上充分研磨 ,。為進一步裂解細胞,，可對勻漿液超聲破碎或反復凍融 。最后,，將勻漿液以 5000×g 離心 5 - 10 分鐘,，取上清用于檢測 。

4. 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘,，去除雜質(zhì)及細胞碎片,，取上清即可用于檢測 。

5. 其他生物標本：如腦脊液,、腹水等,，一般以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清進行檢測 ,。

四、操作流程

1. 準備工作：從冰箱取出試劑盒,，提前 30 分鐘平衡至室溫,，確保所有試劑溫度與室溫一致 。同時,，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 ,。

2. 加樣：設(shè)置空白孔、標準孔和待測樣品孔 ,?？瞻卓准尤?100μL 樣品稀釋液；標準孔分別加入不同濃度的標準品溶液 100μL,；待測樣品孔加入 100μL 待測樣本 ,。加樣時，將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，避免產(chǎn)生氣泡,，隨后用覆膜蓋住酶聯(lián)板,，37°C 溫育 120 分鐘 。

3. 洗滌：溫育結(jié)束后,，棄去孔內(nèi)液體,，將酶標板倒扣在吸水紙上,，輕輕拍干 。每孔加入 350μL 洗滌液,，浸泡 1 - 2 分鐘后,，甩去洗滌液，再次拍干 ,。重復洗滌步驟 5 次,，確保che底洗去未結(jié)合的物質(zhì) 。

4. 加生wu素標記抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的生wu素標記抗體工作液（臨用前配制）,，覆膜后 37°C 溫育 60 分鐘 ,。

5. 再次洗滌：溫育完成后，按上述洗滌方法再次洗滌酶聯(lián)板 5 次 ,。

6. 加 HRP 偶聯(lián)的親和素：每孔加入 100μL 稀釋好的 HRP 偶聯(lián)的親和素工作液,，覆膜后 37°C 溫育 60 分鐘 。

7. 第三次洗滌：重復洗滌步驟 5 次 ,。

8. 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液（TMB）,，輕輕混勻，37°C 避光顯色 ,。顯色時間一般控制在 30 分鐘內(nèi),，期間需密切觀察標準品孔的顏色變化，當肉眼可見標準品的前 3 - 4 孔有明顯的梯度藍色,，后 3 - 4 孔梯度不明顯時,，即可進行下一步 。

9. 終止反應：每孔加入 50μL 終止液,，輕輕混勻,，此時溶液顏色由藍色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色 。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,，且底物反應時間到后應盡快加入終止液 ,。

10. 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的光密度（OD 值） ,。

11. 計算結(jié)果：以標準品的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，繪制標準曲線 ,?？山柚鷮I(yè)的曲線制作軟件（如 Curve Expert 1.3 或 1.4），根據(jù)樣品的 OD 值從標準曲線中查出相應的濃度,，再乘以樣品的稀釋倍數(shù),，即為樣品中白介素 8 受體（可溶性）的實際濃度 。

五,、性能指標

1. 檢測范圍：不同試劑盒有所差異,，常見檢測范圍為 15.6pg/mL - 1000pg/mL 等 。

2. 靈敏度：通?？傻椭聊軝z測出 3pg/mL 甚至更低濃度的可溶性白介素 8 受體 ,。

3. 特異性：試劑盒對白介素 8 受體（可溶性）具有高度特異性，與其他結(jié)構(gòu)類似物幾乎無交叉反應 ,。

4. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)（CV）一般小于 10%,，板間變異系數(shù)小于 15% 。

5. 準確性：通過對已知濃度的可溶性白介素 8 受體標準品多次檢測,，測量值與理論值的偏差在合理范圍,，一般回收率在 80% - 120% 之間 。

六,、注意事項

1. 試劑盒從冰箱取出后需平衡至室溫方可使用,，使用后應立即按要求保存試劑，避免試劑反復凍融 ,。

2. 操作過程中應使用一次性吸頭,，防止交叉污染 。加樣時,，確保吸頭垂直且深入孔底,，避免液體掛壁或產(chǎn)生氣泡 。

3. 洗滌是關(guān)鍵步驟,，洗滌不充分易導致假陽性結(jié)果 ,。若使用自動洗板機，需提前熟練掌握其操作方法,，并定期校準 ,。

4. 底物溶液對光敏感，應避光保存,，使用過程中避免長時間暴露于光下 ,。顯色反應需在 37°C 避光條件下進行，且嚴格控制顯色時間 ,。

5. 終止液具有腐蝕性,，操作時應小心，避免接觸皮膚和眼睛 ,。若不慎接觸,，應立即用大量清水沖洗，并及時就醫(yī) ,。

6. 建議所有標準品和樣本均做雙份檢測,，以提高檢測結(jié)果的準確性和可靠性 。如標本中待測物質(zhì)含量過高,，應先進行稀釋,，再重新測定,，計算結(jié)果時需乘以相應的稀釋倍數(shù) 。

7. 不同批次的試劑盒內(nèi)試劑不能混用,，使用前應仔細核對試劑盒的有效期和批次號 ,。

8. 該試劑盒僅用于科研用途，不得用于臨床診斷 ,。