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關(guān)鍵詞:TPP

上海乾思生物TPP品牌代理經(jīng)營進口胎牛血清,、細(xì)胞因子、ELISA試劑盒,、細(xì)胞、抗體、生物試劑,、耗材、培養(yǎng)基,、一抗、二抗,、其產(chǎn)品吸附均勻，吸附性好，空白值低,，孔底透明度高，代做ELISA實驗等,。完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,。

怎樣查到一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件,？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,，包括細(xì)胞的來源,，培養(yǎng)和凍存條件,，以及相關(guān)文獻等資料,。
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基,？
培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長?？傊?，*MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng),；RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng),；各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基（SFM）,。

測序?qū)嶒灹鞒蹋?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;" />1 收集樣品
2 相關(guān)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yù)混試劑)。
3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機,。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系?；靹蚝?0℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘,，離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系,。PCR儀中反應(yīng)條件設(shè)置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應(yīng),。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;" />6 引物設(shè)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量PCR 按以下反應(yīng)體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I,、Optimized PCR buffer,、5mM MgCI2,、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul，下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul,。定量PCR儀擴增反應(yīng)條件設(shè)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huán))。
8 PCR產(chǎn)物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產(chǎn)物進行溶解曲線分析,，單峰溶解曲線表示擴增產(chǎn)物單一,，無非特異性擴增產(chǎn)物,。溶解曲線生成的反應(yīng)程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s,。

 注意事項：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定，對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融，標(biāo)本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月，-70度可保存6個月,，部分標(biāo)本需添加抑肽酶。

細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,？
　?。?）細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、破損,、漏液等,，重發(fā),；
　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，重發(fā),；
　?。?）存活的細(xì)胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，重發(fā),；
　　（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā),；
　?。?）視具體情況而定。
細(xì)胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？
　?。?）客戶造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)；
　?。?）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；
　?。?）細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā),；
　?。?）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；
　?。?）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；
　　（6）視具體情況而定,。白介素受體相關(guān)激酶ELISA KIT