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關(guān)鍵詞:bioss博奧森

上海乾思生物bioss博奧森品牌代理經(jīng)營進(jìn)口胎牛血清、細(xì)胞因子,、ELISA試劑盒,、細(xì)胞、抗體,、生物試劑,、耗材、培養(yǎng)基,、一抗,、二抗、其產(chǎn)品吸附均勻,，吸附性好,，空白值低，孔底透明度高,，代做ELISA實(shí)驗(yàn)等,。完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,。

怎樣查到一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件,？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫,。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來源,，培養(yǎng)和凍存條件,，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基,？
培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件,。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長,?？傊?MEM,、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng),；各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基（SFM）,。

測序?qū)嶒?yàn)流程：
1 收集樣品
2 相關(guān)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yù)混試劑),。
3 實(shí)驗(yàn)儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機(jī)。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(jī)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系,?；靹蚝?0℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘,，離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系,。PCR儀中反應(yīng)條件設(shè)置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應(yīng),。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;" />6 引物設(shè)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shí)時定量PCR 按以下反應(yīng)體系進(jìn)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase,、SYBR Green I、Optimized PCR buffer,、5mM MgCI2,、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul，下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul,。定量PCR儀擴(kuò)增反應(yīng)條件設(shè)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huán)),。
8 PCR產(chǎn)物溶解曲線分析 將所擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行溶解曲線分析，單峰溶解曲線表示擴(kuò)增產(chǎn)物單一,，無非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,。溶解曲線生成的反應(yīng)程序?yàn)? 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 注意事項：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,，對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融，標(biāo)本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月,，-70度可保存6個月，部分標(biāo)本需添加抑肽酶,。

細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么,？
　?。?）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失,、破損,、漏液等，重發(fā),；
　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā),；
　?。?）存活的細(xì)胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，重發(fā),；
　　（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時后并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；
　?。?）視具體情況而定,。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些,？
　?。?）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā),；
　?。?）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；
　?。?）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā),；
　　（4）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；
　　（5）細(xì)胞收到2天內(nèi),，未告知,，不重發(fā)；
　?。?）視具體情況而定,。