APT試劑盒ELISA如何操作,?
閱讀:130 發(fā)布時間:2014-4-21
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產(chǎn)品詳情:
英文名稱:【APT試劑盒ELISA】
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
廠商:上海乾思生物科技
用 途:用于定量檢測血清,、血漿及相關液體樣本中人28S抗核糖體抗體(28S rRNP) 的含量,。
【APT試劑盒ELISA】標本的采集及保存:
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,,或將標本放于-20℃或-80℃保存,,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,,取上清即可檢測,,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融,。
【APT試劑盒ELISA】操作步驟:
實驗開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,,均需混勻,,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線,。如樣品濃度過高時,,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。
1.加樣:分別設空白孔,、標準孔、待測樣品孔,??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘,。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液,。
2.棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),,37℃,60分鐘,。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,,甩干,,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,,甩干,。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,,60分鐘,。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,,甩干,,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,,37℃避光顯色(30分鐘內,,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,,即可終止),。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液,。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時),;2-8℃(頻繁使用時),。
2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
3.中,、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準,。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,,此為正常現(xiàn)象,,不會對實驗結果造成任何影響,。
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