人結(jié)腸癌細胞系：SW48細胞，SW480細胞,，CACO-2細胞,，SW620細胞，HCT-8細胞,，HCT/V細胞,，HCT-116細胞，LoVo細胞,，HRT-18細胞,，HT-29細胞等

人宮頸癌細胞系：hela細胞，HT-3細胞,，C33A細胞,，SN12C細胞，SKG-IIIa細胞,，Hela S3細胞,，DoTc2-4510細胞，Ca Ski細胞 ,，ME-180細胞等

人卵巢細胞系：KGN細胞,，COV434細胞，IOSE80細胞,，SKOV3細胞,，OVCAR3細胞，HEY細胞等

DC2.4細胞株  MC38細胞株,，MLE-12細胞,，bEND.3細胞

以上細胞系，慧穎細胞庫 大賣

凡購買我公司任何細胞株,，我司將贈送德國SERANA*胎牛血清20ML-50ML試用裝一瓶

更多好禮相送,，咨詢： ！

HK-2細胞 細胞株培養(yǎng) 來源：美國ATCC 慧穎細胞庫 供應(yīng)的HK-2狀態(tài)良好,，存活率高,，活力強，*,，復(fù)蘇周期短,，售后跟蹤及時到位，一對一服務(wù),！

HK-2細胞 細胞株培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,，分別是細菌污染,、支原體污染、原蟲污染,、黑膠蟲污染,、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染,，那么他們污染細胞的特點分別是什么呢,？怎樣能夠減少污染現(xiàn)象的發(fā)生？）

1-細菌

細菌污染常見的有大腸桿菌,，葡萄球菌等,。細菌污染較易發(fā)現(xiàn)，在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,，培養(yǎng)液一般會在短時間內(nèi)變黃,，有時靜置的培養(yǎng)液不混，稍加震蕩會有很多混濁物漂起,。顯微鏡下可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒物漂浮,，有時在細胞表面及周圍有大量細菌存在，細胞停止生長并有中毒表現(xiàn),。

處理：①在培養(yǎng)液中加入相應(yīng)的抗生素,，能夠預(yù)防絕大多數(shù)的細菌污染。

2-真菌

真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,，尤其梅雨季節(jié)快要到了,，進行細胞培養(yǎng)時更易污染。污染細胞的多為煙曲霉,、黑曲霉,、毛霉菌、孢子霉,、白念珠菌,、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物,。一般肉眼可見,，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不混濁,，倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀,、管狀、及樹枝狀菌絲,，并懸浮飄蕩在培養(yǎng)液中。

很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠,；念珠菌或酵母菌形態(tài)呈卵形,，散在細胞周邊和細胞之間生長,。鏡下看時，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈,，以防止與瓶外尤其瓶底外面生長的菌絲相混淆,。

真菌污染后，細胞生長變慢,，但zui后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡,。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,，也很難救活了。

3-支原體

支原體的大小介于細菌和病毒之間,，是一種獨立生活的微生物,。對熱敏感，對一般抗生素不敏感,。支原體的形態(tài)多變,，多吸附在細胞表面和細胞之間。電鏡下觀察,，中心有高密度的密集顆粒,，橫斷面與細胞微絨毛相似。

因國內(nèi)的血清大多數(shù)都沒有做支原體陰性檢測,，而支原體又是牛血清中zui常見的微生物之一,。支原體污染細胞后，培養(yǎng)液輕微發(fā)生混濁．但細胞變化不顯著,，隨著細胞的培養(yǎng)會慢慢死亡,。

支原體污染檢測（熒光染色法）：DNA和與DNA特異性結(jié)合的熒光染料結(jié)合，使得支原體的DNA著色,，然后用熒光顯微鏡觀察,。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。

解決：

1）抗生素排除法：支原體污染預(yù)防比解決好,。如果不小心污染后,，可加入高濃度抗生素（常規(guī)使用的5倍濃度）作用24-48小時，再換入常規(guī)培養(yǎng)液,，但該法不保證有效,。推薦用量：慶大霉素 200μg/ml ,四環(huán)素10μg/ml ，卡那霉素50μg/ml ,。

2）加溫除菌：支原體不耐熱,，可以對支原體污染的細胞熱處理除菌。因高溫對細胞本身也會產(chǎn)生一定影響,，故熱處理前需先進行預(yù)實驗,，確定對細胞影響zui小而能zui大程度的殺死支原體的時間,。

4-黑膠蟲

黑膠蟲的存在目前尚有爭議，其在低倍下為黑色點狀,，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,，培養(yǎng)液也是不渾的，對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,，在細胞增殖旺盛之后會自然消失,，除更換血清外無須特殊處理。

5-原蟲

培養(yǎng)液可輕微渾濁,，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多,，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,，而且細胞狀態(tài)不好,，邊緣不清楚，細胞不透亮,。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng),。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小,，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán),。

6-病毒

組織細胞培養(yǎng)過程中,，如果沒有除去潛在的病毒，就會產(chǎn)生病毒污染,。目前,，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),，但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗,、干擾素等生物制品制作中的難題,。

7-非同種細胞污染

即細胞交叉污染，由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,，往往會使一種細胞被另一種細胞污染,。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,，致使許多實驗宣告無效,。非細胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。

污染是細胞培養(yǎng)的大敵,，預(yù)防和避免污染是成功培養(yǎng)細胞的關(guān)鍵之一,。危機意識要貫徹實驗的始終，否則不僅浪費時間,，而且浪費人力、物力,，甚至造成無法彌補的損失,。

 （如何預(yù)防細胞培養(yǎng)的污染和清除這些污染物呢？）慧穎 細胞庫 技術(shù)為您解答：

一,、污染的預(yù)防

預(yù)防是防止細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法,。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度,。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

1-從操作者做起

1操作者責任心要強,，要細心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練,。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,，按規(guī)定穿隔離衣。進入后關(guān)好門,，坐下來盡量少走動,。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口,。事先要嚴格檢查器材,、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),，更不能隨便使用,，以免造成大批污染。

2,、操作者動作要輕,，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼,。操作時盡量不要談話,，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。

3,、操作時要常更換吸管,，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,。實驗完畢及時收拾,，保持實驗室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

2-從物品,、用品消毒滅菌著手

細胞培養(yǎng)所用物品清洗,、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細,，并在無菌試驗陰性后才能使用,。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

3-防止細胞交叉污染

在進行多種細胞培養(yǎng)操作時,，所用器具要嚴格區(qū)分,，做上標記便于辨別。并按順序進行操作,，避免一起進行時易發(fā)生混亂,。

在進行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口,，以免把細胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞,。

所有細胞一旦購置，或從別處引入,，或自己建立,，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,，重新培養(yǎng),。

二、污染的清除

培養(yǎng)細胞一經(jīng)污染,，多數(shù)較難處理,。如果污染細胞價值不大，宜棄之,；有細胞株留存的或可購置的,，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細胞,，再培養(yǎng),。若污染細胞價值較大，又難于重新得到,，可采取以下辦法清除,。

1-使用抗生素

抗生素對殺滅細菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好,。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好,。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL），污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法,，于加藥后作用24～48小時,，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素,、鏈霉素外,，還可用慶大霉素、卡那霉素,、多粘菌素,、四環(huán)素、制霉菌素等,。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進行治療,。近年來有報道，4-氟,，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）,、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250濃縮液,，-20℃保存?zhèn)溆?，使用濃度Cip為10μg/mL，BM-1為10μg/mL,，BM-2為5μg/mL,。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液,，3天后再吸除培養(yǎng)液,，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)4天,，如此連續(xù)3個輪次,，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次,。

2-使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染,，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,，并且5個月后仍為陰性,。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便,、經(jīng)濟,。

3-加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體,，但對細胞有不良影響,。所以在處理前要進行預(yù)試驗，摸索能zui大限度殺死支原體又對細胞影響zui小的加熱時間。此法有時不可靠,。若先用藥物處理后,，再以41℃加溫處理效果更佳。

4-其他方法

除了上述去除污染的方法外,，還有動物體內(nèi)接種除菌法,、巨噬細胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,，但均較麻煩,，且效果不確定。所以一旦支原體污染,，除非有特別重要價值,，一般均棄之重新培養(yǎng)。

相關(guān)熱賣產(chǎn)品：