一,、雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ ,。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌,。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃ 10~30分鐘,。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
二,、間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,,4℃,;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,;
4.(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,;
5.37℃孵育35-60分鐘,,洗滌;
6.zui后一遍用DDW洗滌,。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
大鼠15-脂加氧酶(15-LO)ELISA試劑盒標(biāo)本收集:
血清:全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃后于1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,,無內(nèi)毒素試管,。血漿:抗凝劑推薦使用EDTA,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,,取上清即可檢測,。避免使用溶血,,高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除,。標(biāo)本收集后若不及時檢測,,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),,避免反復(fù)凍融,,6個月內(nèi)進行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,,請根據(jù)實際情況,,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)),。
酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)高精度移液器,,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,200-1000μL37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水。
大鼠15-脂加氧酶(15-LO)ELISA試劑盒 其他試劑盒:
大鼠碳酸酐酶(CA)ELISA 試劑盒
大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA 試劑盒
大鼠髓系細胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)ELISA試劑盒
大鼠基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒
人EB病毒衣殼抗原IgA(EBV-VCA-IgA)ELISA試劑盒(定性)
人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)ELISA試劑盒
人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒
人胱天蛋白酶9(Casp-9)Elisa試劑盒(細胞上清液)
人EB病毒早期抗原(EA)IgA ELISA試劑盒(定性)
山羊傳染性胸膜肺炎病抗體Elisa試劑盒(定性)
人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒
大鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒
小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒
豬口蹄疫抗體ELISA 試劑盒(定性)
小鼠IL-4 Elisa試劑盒
小鼠IFN-r Elisa試劑盒
禽流感抗體ELISA試劑盒(定性)
黃曲霉毒素B1Elisa試劑盒
豬藍耳病抗體ELISA試劑盒(定性)
豬瘟抗體ELISA試劑盒(定性)
禽流感抗體ELISA試劑盒(定性)
人內(nèi)皮素-1(ET-1)ELISA試劑盒
人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白NAGL ELISA試劑盒(血清)
人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白NAGL ELISA試劑盒(尿液)
人EB病毒衣殼抗原IgA(EBV-VCA-IgA)ELISA試劑盒(定性)
人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒(尿液)
人EB病毒早期抗原(EA)IgA ELISA試劑盒(定性)
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)Elisa試劑盒
小鼠免疫球蛋白G1(IgG1)Elisa試劑盒
小鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)Elisa試劑盒
人尿白細胞介素-18(IL-18)Elisa試劑盒(尿液)
山羊傳染性胸膜肺炎抗體Elisa試劑盒(定性)
人成纖維細胞生長因子4(FGF4)ELISA試劑盒
人腎損傷因子-1(KIM-1)Elisa試劑盒(尿液)
大鼠抗II型膠原蛋白抗體Elisa試劑盒