BioSwamp人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA試劑盒（HM10644）

產(chǎn)品名稱(chēng)：人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA試劑盒

英文名稱(chēng)：Human sex hormone-binding globulin（SHBG） ELISA Kit

別名：人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA檢測(cè)試劑盒,；人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA酶免試劑盒,；人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA Kit

品牌：BioSwamp

規(guī)格：96T

貨號(hào)：HM10644

有效期：six months

溫度：2-8°C

價(jià)格：2300元

說(shuō)明：本試劑盒用于體外定量檢測(cè)人血清、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）的含量。

BioSwamp人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）ELISA試劑盒（HM10644） 說(shuō)明書(shū)：

使用目的

本試劑盒用于體外定量檢測(cè)人血清,、血漿、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）的含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）水平。用純化的人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入性激素結(jié)合球蛋白（SHBG），再與HRP標(biāo)記的性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）濃度,。

注意事項(xiàng)

l           本試劑盒僅用于科研,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

l           使用試劑盒前,，請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),，以試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)，請(qǐng)務(wù)必理解說(shuō)明書(shū)內(nèi)容,。

l           酶標(biāo)包被板屬于可拆型,，開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入鋁箔袋密封并2-8°C保存,。

l           加樣樣本和試劑應(yīng)盡快完成,。

l           避免實(shí)驗(yàn)過(guò)程中酶標(biāo)板干燥；清洗后盡快加試劑,。

l           實(shí)驗(yàn)開(kāi)始,，所有試劑應(yīng)平衡到室溫 （21-26°C） 后方可進(jìn)行。溫度會(huì)影響吸光度值,，但不影響樣本值,。

l           切忌用口加樣，以免試劑和樣本粘到皮膚和粘膜上,。

l           不要在處理樣本或試劑的區(qū)域抽煙,、吃東西、喝酒或化妝,。

l           操作時(shí)帶一次性手套,，微生物的污染會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性。

l           操作應(yīng)按照國(guó)家規(guī)定的安全條列進(jìn)行,。

l           過(guò)期的試劑盒切勿再使用,。

l           TMB 底物對(duì)皮膚有刺激性，不慎入眼,，立即用大量水沖洗,，皮膚上不慎接觸到也應(yīng)立即用肥皂，并用大量的水沖洗,。試驗(yàn)中被污染的物品在下次使用前應(yīng)盡快清洗,。

試劑盒組成

1.說(shuō)明書(shū)                             1份

2.封板膜                             2張

3.酶標(biāo)包被板                       12孔×8條

4.標(biāo)準(zhǔn)  480 nmol/L                0.6ml×1 瓶

5.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液                     2ml×1 瓶

6.生物素標(biāo)記的抗SHBG抗體         1.5ml×1瓶

7.顯色劑A液                       6ml×1瓶

8.顯色劑B液                       6ml×1瓶

9.終止液                         6ml×1瓶

10.酶標(biāo)試劑                      6ml×1瓶

11. 30倍濃縮洗滌液               20ml×1瓶

需要而未提供的試劑和器材

l           吸光度值在450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)的酶標(biāo)儀。

l           1-2ml的加樣器,。

l           100 ml和1L的量筒,。

l           吸水紙。

l           37°C 恒溫箱,。

l           蒸餾水或去離子水,。

l           數(shù)據(jù)分析和繪圖軟件,，圖紙。

l           標(biāo)準(zhǔn)和樣品稀釋的試管,。

儲(chǔ)存條件

u           有效期內(nèi)的試劑如開(kāi)封后未用完,，請(qǐng)2-8°C 保存。

u           過(guò)期的試劑請(qǐng)不要用,，打開(kāi)后的試劑2-8°C 保存,。

u           酶標(biāo)包被板必須2-8°C 保存，如有未用完的酶標(biāo)包被板,，打開(kāi)的鋁箔袋須密封并2-8°C 保存,。

u           開(kāi)封后的試劑盒2-8°C只能保存8周。

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

樣本處理及要求

1.    血清-用采血管收集血液,，室溫血液自然凝固30分鐘，1000 xg離心15分鐘左右,，收集上清,，盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，或者分裝后-20°C 或 -80°C 保存,。

2.    血漿-收集好的血漿根據(jù)要求選擇EDTA或者肝素作為抗凝劑,，2-8°C 1000 xg離心15分鐘左右，30分鐘內(nèi)收集好,，-20°C 或 -80°C 保存,，避免反復(fù)凍融。

3.    細(xì)胞上清及相關(guān)液體-收集好的樣本離心后應(yīng)盡快實(shí)驗(yàn),，或者分裝后-20°C 或 -80°C 保存,，避免反復(fù)凍融。

操作步驟

u           注意事項(xiàng)

l           所有試劑和樣本使用前必須在室溫下平衡,，混勻試劑時(shí)不應(yīng)起泡沫,。

l           一旦實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，各操作步驟都應(yīng)盡快完成,。

l           避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管,，以免交叉污染。

l           一般情況,，酶的反應(yīng)與時(shí)間和溫度成正比。

u           操作步驟

1.       標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)簻?zhǔn)備小試管6只,，依次編好號(hào)碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,，充分混勻;再在該試管中取100ul加入第二支試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第四只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋后各管濃度分別是：240nmol/L,120nmol/L,60nmol/L, 30nmol/L,15nmol/L,0 nmol/L。

在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,，依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul（建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔）,。

2.       加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品、酶標(biāo)試劑及生物素標(biāo)記的抗SHBG抗體,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl,，然后再加生物素標(biāo)記的抗SHBG抗體10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.       溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.       配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用,。

5.       洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

6.       加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7.       溫育：操作同3,。

8.       洗滌：操作同5。

9.       顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.  測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，即為樣品的實(shí)際濃度,。