U251細胞株復蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：U251細胞

中文名稱：人膠質(zhì)瘤細胞

種屬：人

來源：星形膠質(zhì)細胞瘤,；男性

培養(yǎng)條件：DMEM

生長狀態(tài)：貼壁

2017年新學期,，迎著朝陽，放飛夢想，久別重逢,，相聚一堂,，百尺竿頭，更進一步,，學無止境,，自立自強，為國爭光,，慧穎細胞庫為答謝各位莘莘學子的厚愛,，在新學期開學之際，將慧穎細胞庫1223株細胞特惠出售,，更多活動詳情,，請致電市場部！

U251細胞株復蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細胞復蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細胞狀態(tài)不好,，形態(tài)不佳,，透光度亦不好，如果老師認為復蘇過程沒問題,，那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水,，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度,，培養(yǎng)基,、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%,，看看能否幫助貼壁,，當然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細胞沒問題,。

有的老師認為首先應該懷疑凍存,，實際上復蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單,，而且死板,。

1、確認下凍存的時候是不是消化的時間過長,，這是一般人所注意不到的,，即使書上也不講這個問題，但我們因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗,，這個是絕大部分人細胞復不活的一個原因,。太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,，表現(xiàn)為先貼后死,，原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡,。

2,、老師的凍存液好不好,，是什么，甘油還是DMSO,，質(zhì)量非常重要,，否則也會死亡。

3,、老師的凍存液的量加的是不是太多,，ATCC推薦是不超過7%，大于5%,，太多也不好,。

4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,，這個有一些影響,，但不算太大。

5,、老師的凍存是否按部就班,，就是所溫度梯度是不是把握嚴格，很多人容易忘卻這個事情,，因為這個東西流程長,。

6、如果老師的細胞污染,，你是否能很快看到,。從這個角度講建議去除離心這步。

7,、老師的細胞在凍存前是否過密,。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個概念的,，所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,，這個細菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染,，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,，問題在操作。我們的細胞房不換拖鞋,，非常臟,，別人的細胞都污染，很多細胞都污染到絕種,，但我們的只污染一次（兩年內(nèi)只有兩瓶）,，那次是因為當初有某高校組織學生參觀我們細胞庫給動過了，我們每次細胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染,，我們會認為老師的復蘇培養(yǎng)細胞經(jīng)驗還需要進一步熟練和積累經(jīng)驗,。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題,，這個很重要,，不能靠猜。

U251細胞株復蘇失敗原因分析

293AD   人胚腎細胞  人  胚腎,；5型腺病毒轉(zhuǎn)化,；女性   DMEM    貼壁   

T241    小鼠纖維肉瘤細胞    小鼠    纖維肉瘤    DMEM    貼壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮細胞  大鼠    胃黏膜；上皮細胞,；自發(fā)永生,；Wistar  1640    貼壁   

BT  新生牛鼻甲細胞  牛  鼻甲；自發(fā)永生,；Holstein    EMEM    貼壁   

USMC    大鼠血管平滑肌細胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    貼壁   

SBC-5   人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌,；胸腔積液轉(zhuǎn)移；男性  1640    貼壁   

D407    人視網(wǎng)膜色素上皮細胞    人  視網(wǎng)膜,；色素上皮細胞,；自發(fā)永生；男性    DMEM    貼壁   

ETCC-007    人乳腺導管癌細胞    人  浸潤性導管癌,；女性  DMEM    貼壁   

HLF-a  人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌,；女性    1640    貼壁   

LK2 人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁   

ESC 人表皮干細胞    人  表皮干細胞  DMEM    貼壁   

MASMC   小鼠氣道平滑肌細胞  小鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

M109    小鼠肺癌細胞    小鼠    肺癌    DMEM    貼壁   

SK-GT-2 人胃癌細胞  人  胃底癌,；男性    1640    貼壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病細胞    人  急性髓系白血?。荒行?nbsp;   IMDM    懸浮   

Kelly   人神經(jīng)母細胞瘤細胞  人  神經(jīng)母細胞瘤,；女性  DMEM    貼壁   

NCI-H441    人肺腺癌細胞    人  乳頭狀肺腺癌,；男性  1640    貼壁   

COLO-16 人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌；女性  DMEM    貼壁   

HEL299  人紅白細胞白血病細胞    人  紅白細胞白血病  1640    懸浮   

SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細胞  人  子宮平滑肌瘤,；女性  EMEM    貼壁   

NB1-RGB 人皮膚成纖維細胞    人  皮膚,；成纖維細胞；男性  DMEM    貼壁   

S91 小鼠黑色素瘤細胞    小鼠    黑色素瘤,；雄性,；DBA 1640    貼壁       

NCI-H2170   人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌；男性    1640    貼壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮細胞  人  頭頸鱗癌,；胸腔積液轉(zhuǎn)移,；男性    DMEM    貼壁       

NCI-H2073   人非小細胞肺癌細胞  人  肺腺癌；男性    1640    貼壁       

HSC-5   人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌,；男性  DMEM    貼壁       

KYSE520 人食管鱗癌細胞  人  食管鱗癌,；女性  DMEM    貼壁       

OCM-1   人眼脈絡膜黑色素瘤細胞  人  葡萄膜黑色素瘤,；女性    DMEM    貼壁       

VE  人血管內(nèi)皮細胞  人  血管；內(nèi)皮細胞  DMEM    貼壁       

NT2/D1  人畸胎瘤細胞    人  畸胎瘤,；肺轉(zhuǎn)移；男性    DMEM    貼壁       

YTMLC-90    人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌,；男性    1640    貼壁       

8305C   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺癌,；女性  DMEM    貼壁       

L132    人胚胎肺上皮細胞    人  胚肺；女性  DMEM    貼壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前體細胞    小鼠    脂肪前體細胞,；雄性,；Swiss albino    DMEM    貼壁       

SHI-1   人單核細胞白血病細胞    人  急性單核細胞白血病,；男性    1640    懸浮       

HLE 人肝癌細胞  人  肝癌,；男性  1640    貼壁       

OS-732  人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤  McCOY's   貼壁       

NCI-H526    人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌；骨髓轉(zhuǎn)移,；男性  1640    貼壁   

ReNcell CX  人神經(jīng)干細胞    人  神經(jīng)干細胞  DMEM    貼壁   

IHH-4   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺乳頭狀癌,；男性    DMEM    貼壁   

VK2/E6E7    人陰道上皮細胞  人  陰道；上皮細胞,；HPV16轉(zhuǎn)化,；女性 DMEM    貼壁   

N1E-115 小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞    小鼠    神經(jīng)母細胞瘤；雄性,；A/J EMEM    貼壁   

HMEL    永生上皮細胞    人  上皮細胞,；永生化    1640    貼壁   

LN229   人膠質(zhì)母細胞瘤細胞  人  膠質(zhì)母細胞瘤；女性  DMEM    貼壁   

PANC05.04   人胰腺癌細胞    人  胰腺管癌,；女性  DMEM    貼壁   

HRVEC   人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞  人  視網(wǎng)膜微血管,；內(nèi)皮細胞  DMEM    貼壁   

rUCMSCs 大鼠臍帶間充質(zhì)干細胞    大鼠    臍帶；間充質(zhì)干細胞  DMEM    貼壁   

rRTEC   大鼠腎小管上皮細胞  大鼠    腎小管,；上皮細胞    DMEM    貼壁   

HCC1569 人乳腺癌細胞    人  乳腺管癌,；女性  DMEM    貼壁   

Mel-RM  人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤；神經(jīng)節(jié)轉(zhuǎn)移,；男性  DMEM    貼壁   

WM-266-4    人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤,；皮膚轉(zhuǎn)移；女性    DMEM    貼壁   

UT-7    人急性成巨核細胞白血病細胞  人  急性成巨核細胞白血??；男性  1640    懸浮   

KPL1    人乳腺癌細胞    人  浸潤性導管癌；女性  EMEM    貼壁   

PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細胞    人  肺泡橫紋肌肉瘤,；男性    DMEM    貼壁   

CEF 雞胚成纖維細胞  雞  胚胎,；成纖維細胞    DMEM/F12    貼壁   

143B    人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤；男性    McCoy’s 貼壁   

CT26.CL25   小鼠結(jié)腸癌細胞  小鼠    結(jié)腸癌,； BALB/c 1640    貼壁   

C166    小鼠血管內(nèi)皮細胞    小鼠    血管內(nèi)皮    DMEM    貼壁   

A375SM  人惡性黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤,；女性  DMEM    貼壁   

HKBML   人原發(fā)中樞淋巴瘤細胞    人  腦,；淋巴瘤；男性    1640    懸浮   

為了應付季節(jié)變化CV-1細胞運輸,、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題,，公司特做以下建議：

1）細胞的運輸、轉(zhuǎn)移過程中,，請勿打開自封袋,；拿放細胞時請持瓶體，切勿在非無菌環(huán)球中碰觸,、擰動瓶口封口膜位置

2）進入生物安全柜前,，打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進操作臺（不建議使用酒精棉球擦拭）,，撕開封口膜后,，用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開瓶蓋（如是貼壁細胞,，請用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,，切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內(nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

U251細胞株復蘇失敗原因分析