U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析
產品名稱:U-118 MG細胞
中文名稱:人腦星形膠質母細胞瘤
種屬:人
來源:星形膠質母細胞瘤,;男性
培養(yǎng)條件:DMEM
生長狀態(tài):貼壁
2017年新學期,迎著朝陽,,放飛夢想,,久別重逢,相聚一堂,,百尺竿頭,,更進一步,學無止境,,自立自強,,為國爭光,慧穎細胞庫為答謝各位莘莘學子的厚愛,,在新學期開學之際,,將慧穎細胞庫1223株細胞特惠出售,更多活動詳情,,請致電市場部,!
U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析
有的客戶在COS-1細胞復蘇傳代后發(fā)現貼壁細胞狀態(tài)不好,,形態(tài)不佳,透光度亦不好,,如果老師認為復蘇過程沒問題,,那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,,二氧化碳濃度,,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié),。要么加高濃度FBS 15-20%,,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,,還有確信拿來的細胞沒問題,。
有的老師認為首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,,因為操作簡單,,而且死板。
1,、確認下凍存的時候是不是消化的時間過長,,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,,但我們因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗,,這個是絕大部分人細胞復不活的一個原因。太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,,表現為先貼后死,,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉的死亡,。
2,、老師的凍存液好不好,是什么,,甘油還是DMSO,,質量非常重要,否則也會死亡,。
3,、老師的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,,大于5%,,太多也不好。
4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,,這個有一些影響,,但不算太大。
5,、老師的凍存是否按部就班,,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,,因為這個東西流程長,。
6、如果老師的細胞污染,,你是否能很快看到,。從這個角度講建議去除離心這步。
7,、老師的細胞在凍存前是否過密,。
還有,我們是不贊成孵箱污染這個概念的,,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,,但這不代表孵箱污染,,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作,。我們的細胞房不換拖鞋,,非常臟,別人的細胞都污染,,很多細胞都污染到絕種,,但我們的只污染一次(兩年內只有兩瓶),那次是因為當初有某高校組織學生參觀我們細胞庫給動過了,,我們每次細胞擺放順序都是記住的,。如果老師老懷疑孵箱污染,我們會認為老師的復蘇培養(yǎng)細胞經驗還需要進一步熟練和積累經驗,。
每次污染的原因都要盡可能的找,,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,,不能靠猜,。
U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析
293AD 人胚腎細胞 人 胚腎;5型腺病毒轉化,;女性 DMEM 貼壁
T241 小鼠纖維肉瘤細胞 小鼠 纖維肉瘤 DMEM 貼壁
RGM1 大鼠正常胃黏膜上皮細胞 大鼠 胃黏膜,;上皮細胞;自發(fā)永生;Wistar 1640 貼壁
BT 新生牛鼻甲細胞 牛 鼻甲,;自發(fā)永生,;Holstein EMEM 貼壁
USMC 大鼠血管平滑肌細胞 大鼠 血管平滑肌 DMEM 貼壁
SBC-5 人小細胞肺癌細胞 人 小細胞肺癌;胸腔積液轉移,;男性 1640 貼壁
D407 人視網膜色素上皮細胞 人 視網膜,;色素上皮細胞;自發(fā)永生,;男性 DMEM 貼壁
ETCC-007 人乳腺導管癌細胞 人 浸潤性導管癌,;女性 DMEM 貼壁
HLF-a 人肺鱗癌細胞 人 肺鱗癌;女性 1640 貼壁
LK2 人肺鱗癌細胞 人 肺鱗癌,;男性 1640 貼壁
ESC 人表皮干細胞 人 表皮干細胞 DMEM 貼壁
MASMC 小鼠氣道平滑肌細胞 小鼠 氣道平滑肌 DMEM 貼壁
M109 小鼠肺癌細胞 小鼠 肺癌 DMEM 貼壁
SK-GT-2 人胃癌細胞 人 胃底癌,;男性 1640 貼壁
MOLM-14 人急性髓系白血病細胞 人 急性髓系白血病,;男性 IMDM 懸浮
Kelly 人神經母細胞瘤細胞 人 神經母細胞瘤,;女性 DMEM 貼壁
NCI-H441 人肺腺癌細胞 人 乳頭狀肺腺癌;男性 1640 貼壁
COLO-16 人皮膚鱗癌細胞 人 皮膚鱗癌,;女性 DMEM 貼壁
HEL299 人紅白細胞白血病細胞 人 紅白細胞白血病 1640 懸浮
SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細胞 人 子宮平滑肌瘤,;女性 EMEM 貼壁
NB1-RGB 人皮膚成纖維細胞 人 皮膚;成纖維細胞,;男性 DMEM 貼壁
S91 小鼠黑色素瘤細胞 小鼠 黑色素瘤,;雄性;DBA 1640 貼壁
NCI-H2170 人肺鱗癌細胞 人 肺鱗癌,;男性 1640 貼壁
RPMI2650 人鼻腔上皮細胞 人 頭頸鱗癌,;胸腔積液轉移;男性 DMEM 貼壁
NCI-H2073 人非小細胞肺癌細胞 人 肺腺癌,;男性 1640 貼壁
HSC-5 人皮膚鱗癌細胞 人 皮膚鱗癌,;男性 DMEM 貼壁
KYSE520 人食管鱗癌細胞 人 食管鱗癌;女性 DMEM 貼壁
OCM-1 人眼脈絡膜黑色素瘤細胞 人 葡萄膜黑色素瘤,;女性 DMEM 貼壁
VE 人血管內皮細胞 人 血管,;內皮細胞 DMEM 貼壁
NT2/D1 人畸胎瘤細胞 人 畸胎瘤;肺轉移,;男性 DMEM 貼壁
YTMLC-90 人肺鱗癌細胞 人 肺鱗癌,;男性 1640 貼壁
8305C 人甲狀腺癌細胞 人 甲狀腺癌;女性 DMEM 貼壁
L132 人胚胎肺上皮細胞 人 胚肺,;女性 DMEM 貼壁
3T3-F442A 小鼠脂肪前體細胞 小鼠 脂肪前體細胞,;雄性;Swiss albino DMEM 貼壁
SHI-1 人單核細胞白血病細胞 人 急性單核細胞白血??;男性 1640 懸浮
HLE 人肝癌細胞 人 肝癌;男性 1640 貼壁
OS-732 人骨肉瘤細胞 人 骨肉瘤 McCOY's 貼壁
NCI-H526 人小細胞肺癌細胞 人 小細胞肺癌;骨髓轉移,;男性 1640 貼壁
ReNcell CX 人神經干細胞 人 神經干細胞 DMEM 貼壁
IHH-4 人甲狀腺癌細胞 人 甲狀腺乳頭狀癌,;男性 DMEM 貼壁
VK2/E6E7 人陰道上皮細胞 人 陰道;上皮細胞,;HPV16轉化,;女性 DMEM 貼壁
N1E-115 小鼠神經母細胞瘤細胞 小鼠 神經母細胞瘤;雄性,;A/J EMEM 貼壁
HMEL 永生上皮細胞 人 上皮細胞,;永生化 1640 貼壁
LN229 人膠質母細胞瘤細胞 人 膠質母細胞瘤;女性 DMEM 貼壁
PANC05.04 人胰腺癌細胞 人 胰腺管癌,;女性 DMEM 貼壁
HRVEC 人視網膜微血管內皮細胞 人 視網膜微血管,;內皮細胞 DMEM 貼壁
rUCMSCs 大鼠臍帶間充質干細胞 大鼠 臍帶;間充質干細胞 DMEM 貼壁
rRTEC 大鼠腎小管上皮細胞 大鼠 腎小管,;上皮細胞 DMEM 貼壁
HCC1569 人乳腺癌細胞 人 乳腺管癌,;女性 DMEM 貼壁
Mel-RM 人黑色素瘤細胞 人 黑色素瘤;神經節(jié)轉移,;男性 DMEM 貼壁
WM-266-4 人黑色素瘤細胞 人 黑色素瘤,;皮膚轉移;女性 DMEM 貼壁
UT-7 人急性成巨核細胞白血病細胞 人 急性成巨核細胞白血??;男性 1640 懸浮
KPL1 人乳腺癌細胞 人 浸潤性導管癌;女性 EMEM 貼壁
PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細胞 人 肺泡橫紋肌肉瘤,;男性 DMEM 貼壁
CEF 雞胚成纖維細胞 雞 胚胎,;成纖維細胞 DMEM/F12 貼壁
143B 人骨肉瘤細胞 人 骨肉瘤,;男性 McCoy’s 貼壁
CT26.CL25 小鼠結腸癌細胞 小鼠 結腸癌,; BALB/c 1640 貼壁
C166 小鼠血管內皮細胞 小鼠 血管內皮 DMEM 貼壁
A375SM 人惡性黑色素瘤細胞 人 黑色素瘤;女性 DMEM 貼壁
HKBML 人原發(fā)中樞淋巴瘤細胞 人 腦,;淋巴瘤,;男性 1640 懸浮
為了應付季節(jié)變化CV-1細胞運輸、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題,,公司特做以下建議:
1)細胞的運輸,、轉移過程中,請勿打開自封袋,;拿放細胞時請持瓶體,,切勿在非無菌環(huán)球中碰觸、擰動瓶口封口膜位置
2)進入生物安全柜前,,打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶,,噴上酒精放進操作臺(不建議使用酒精棉球擦拭),撕開封口膜后,用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈(3秒左右)
3)豎立培養(yǎng)瓶,,擰開瓶蓋(如是貼壁細胞,,請用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內)
4)更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基,,嚴格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)
U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析
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