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U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析

時間:2017-2-24閱讀:1157

U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析

產品名稱:U-118 MG細胞

中文名稱:人腦星形膠質母細胞瘤

種屬:人

來源:星形膠質母細胞瘤,;男性

培養(yǎng)條件:DMEM

生長狀態(tài):貼壁

2017年新學期,迎著朝陽,,放飛夢想,,久別重逢,相聚一堂,,百尺竿頭,,更進一步,學無止境,,自立自強,,為國爭光,慧穎細胞庫為答謝各位莘莘學子的厚愛,,在新學期開學之際,,將慧穎細胞庫1223株細胞特惠出售,更多活動詳情,,請致電市場部,!

 

U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細胞復蘇傳代后發(fā)現貼壁細胞狀態(tài)不好,,形態(tài)不佳,透光度亦不好,,如果老師認為復蘇過程沒問題,,那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水,還有培養(yǎng)箱,,二氧化碳濃度,,培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié),。要么加高濃度FBS 15-20%,,看看能否幫助貼壁,當然也需要考慮血清問題,,還有確信拿來的細胞沒問題,。

有的老師認為首先應該懷疑凍存,實際上復蘇出問題的可能非常小,,因為操作簡單,,而且死板。

1,、確認下凍存的時候是不是消化的時間過長,,這是一般人所注意不到的,即使書上也不講這個問題,,但我們因為這個問題就兩種肺癌細胞和一種肝癌細胞專門做過試驗,,這個是絕大部分人細胞復不活的一個原因。太長的消化時間會讓細胞復蘇時失去貼壁能力,,表現為先貼后死,,原因是在你復蘇的時候細胞已進入凋亡程序,不可逆轉的死亡,。

 

2,、老師的凍存液好不好,是什么,,甘油還是DMSO,,質量非常重要,否則也會死亡,。

 

3,、老師的凍存液的量加的是不是太多,ATCC推薦是不超過7%,,大于5%,,太多也不好。

 

4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻,,這個有一些影響,,但不算太大。

 

5,、老師的凍存是否按部就班,,就是所溫度梯度是不是把握嚴格,很多人容易忘卻這個事情,,因為這個東西流程長,。

 

6、如果老師的細胞污染,,你是否能很快看到,。從這個角度講建議去除離心這步。

 

7,、老師的細胞在凍存前是否過密,。

 

還有,我們是不贊成孵箱污染這個概念的,,所有在一個孵箱里的細胞都污染一個細菌的話,這個細菌是源于孵箱的,,但這不代表孵箱污染,,因為孵箱無論你如何處理都有大量的細菌,問題在操作,。我們的細胞房不換拖鞋,,非常臟,別人的細胞都污染,,很多細胞都污染到絕種,,但我們的只污染一次(兩年內只有兩瓶),那次是因為當初有某高校組織學生參觀我們細胞庫給動過了,,我們每次細胞擺放順序都是記住的,。如果老師老懷疑孵箱污染,我們會認為老師的復蘇培養(yǎng)細胞經驗還需要進一步熟練和積累經驗,。

每次污染的原因都要盡可能的找,,以后就不犯同樣的問題,這個很重要,,不能靠猜,。

U-118 MG細胞株復蘇失敗原因分析

293AD   人胚腎細胞  人  胚腎;5型腺病毒轉化,;女性   DMEM    貼壁   

T241    小鼠纖維肉瘤細胞    小鼠    纖維肉瘤    DMEM    貼壁   

RGM1    大鼠正常胃黏膜上皮細胞  大鼠    胃黏膜,;上皮細胞;自發(fā)永生;Wistar  1640    貼壁   

BT  新生牛鼻甲細胞  牛  鼻甲,;自發(fā)永生,;Holstein    EMEM    貼壁   

USMC    大鼠血管平滑肌細胞  大鼠    血管平滑肌  DMEM    貼壁   

SBC-5   人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌;胸腔積液轉移,;男性  1640    貼壁   

D407    人視網膜色素上皮細胞    人  視網膜,;色素上皮細胞;自發(fā)永生,;男性    DMEM    貼壁   

ETCC-007    人乳腺導管癌細胞    人  浸潤性導管癌,;女性  DMEM    貼壁   

HLF-a  人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌;女性    1640    貼壁   

LK2 人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌,;男性    1640    貼壁   

ESC 人表皮干細胞    人  表皮干細胞  DMEM    貼壁   

MASMC   小鼠氣道平滑肌細胞  小鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

M109    小鼠肺癌細胞    小鼠    肺癌    DMEM    貼壁   

SK-GT-2 人胃癌細胞  人  胃底癌,;男性    1640    貼壁   

MOLM-14 人急性髓系白血病細胞    人  急性髓系白血病,;男性    IMDM    懸浮   

Kelly   人神經母細胞瘤細胞  人  神經母細胞瘤,;女性  DMEM    貼壁   

NCI-H441    人肺腺癌細胞    人  乳頭狀肺腺癌;男性  1640    貼壁   

COLO-16 人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌,;女性  DMEM    貼壁   

HEL299  人紅白細胞白血病細胞    人  紅白細胞白血病  1640    懸浮   

SK-UT-1 人子宮平滑肌瘤細胞  人  子宮平滑肌瘤,;女性  EMEM    貼壁   

NB1-RGB 人皮膚成纖維細胞    人  皮膚;成纖維細胞,;男性  DMEM    貼壁   

S91 小鼠黑色素瘤細胞    小鼠    黑色素瘤,;雄性;DBA 1640    貼壁       

NCI-H2170   人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌,;男性    1640    貼壁       

RPMI2650    人鼻腔上皮細胞  人  頭頸鱗癌,;胸腔積液轉移;男性    DMEM    貼壁       

NCI-H2073   人非小細胞肺癌細胞  人  肺腺癌,;男性    1640    貼壁       

HSC-5   人皮膚鱗癌細胞  人  皮膚鱗癌,;男性  DMEM    貼壁       

KYSE520 人食管鱗癌細胞  人  食管鱗癌;女性  DMEM    貼壁       

OCM-1   人眼脈絡膜黑色素瘤細胞  人  葡萄膜黑色素瘤,;女性    DMEM    貼壁       

VE  人血管內皮細胞  人  血管,;內皮細胞  DMEM    貼壁       

NT2/D1  人畸胎瘤細胞    人  畸胎瘤;肺轉移,;男性    DMEM    貼壁       

YTMLC-90    人肺鱗癌細胞    人  肺鱗癌,;男性    1640    貼壁       

8305C   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺癌;女性  DMEM    貼壁       

L132    人胚胎肺上皮細胞    人  胚肺,;女性  DMEM    貼壁       

3T3-F442A   小鼠脂肪前體細胞    小鼠    脂肪前體細胞,;雄性;Swiss albino    DMEM    貼壁       

SHI-1   人單核細胞白血病細胞    人  急性單核細胞白血??;男性    1640    懸浮       

HLE 人肝癌細胞  人  肝癌;男性  1640    貼壁       

OS-732  人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤  McCOY's   貼壁       

NCI-H526    人小細胞肺癌細胞    人  小細胞肺癌;骨髓轉移,;男性  1640    貼壁   

ReNcell CX  人神經干細胞    人  神經干細胞  DMEM    貼壁   

IHH-4   人甲狀腺癌細胞  人  甲狀腺乳頭狀癌,;男性    DMEM    貼壁   

VK2/E6E7    人陰道上皮細胞  人  陰道;上皮細胞,;HPV16轉化,;女性 DMEM    貼壁   

N1E-115 小鼠神經母細胞瘤細胞    小鼠    神經母細胞瘤;雄性,;A/J EMEM    貼壁   

HMEL    永生上皮細胞    人  上皮細胞,;永生化    1640    貼壁   

LN229   人膠質母細胞瘤細胞  人  膠質母細胞瘤;女性  DMEM    貼壁   

PANC05.04   人胰腺癌細胞    人  胰腺管癌,;女性  DMEM    貼壁   

HRVEC   人視網膜微血管內皮細胞  人  視網膜微血管,;內皮細胞  DMEM    貼壁   

rUCMSCs 大鼠臍帶間充質干細胞    大鼠    臍帶;間充質干細胞  DMEM    貼壁   

rRTEC   大鼠腎小管上皮細胞  大鼠    腎小管,;上皮細胞    DMEM    貼壁   

HCC1569 人乳腺癌細胞    人  乳腺管癌,;女性  DMEM    貼壁   

Mel-RM  人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤;神經節(jié)轉移,;男性  DMEM    貼壁   

WM-266-4    人黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤,;皮膚轉移;女性    DMEM    貼壁   

UT-7    人急性成巨核細胞白血病細胞  人  急性成巨核細胞白血??;男性  1640    懸浮   

KPL1    人乳腺癌細胞    人  浸潤性導管癌;女性  EMEM    貼壁   

PLA-802 人惡性橫紋肌肉瘤細胞    人  肺泡橫紋肌肉瘤,;男性    DMEM    貼壁   

CEF 雞胚成纖維細胞  雞  胚胎,;成纖維細胞    DMEM/F12    貼壁   

143B    人骨肉瘤細胞    人  骨肉瘤,;男性    McCoy’s 貼壁   

CT26.CL25   小鼠結腸癌細胞  小鼠    結腸癌,; BALB/c 1640    貼壁   

C166    小鼠血管內皮細胞    小鼠    血管內皮    DMEM    貼壁   

A375SM  人惡性黑色素瘤細胞  人  黑色素瘤;女性  DMEM    貼壁   

HKBML   人原發(fā)中樞淋巴瘤細胞    人  腦,;淋巴瘤,;男性    1640    懸浮   

為了應付季節(jié)變化CV-1細胞運輸、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題,,公司特做以下建議:

1)細胞的運輸,、轉移過程中,請勿打開自封袋,;拿放細胞時請持瓶體,,切勿在非無菌環(huán)球中碰觸、擰動瓶口封口膜位置

2)進入生物安全柜前,,打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶,,噴上酒精放進操作臺(不建議使用酒精棉球擦拭),撕開封口膜后,用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈(3秒左右)

3)豎立培養(yǎng)瓶,,擰開瓶蓋(如是貼壁細胞,,請用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基,切勿讓瓶口處的液體回流進瓶內)

4)更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基,,嚴格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

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