HEC-1-A細(xì)胞，HEC-1-A細(xì)胞株

細(xì)胞名稱：HEC-1-A細(xì)胞,，HEC-1-A細(xì)胞株

傳代方法：消化3-5分鐘,。1:2.3天長滿

傳代情況：不詳

支原體檢測：陰性

使用權(quán)限：A類

HEC-1-A細(xì)胞，HEC-1-A細(xì)胞株備注：　

怎樣選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體,？

1. 一抗選擇要點(diǎn)

（1）確定抗體的名字,，注意中英文名字、它名,、亞型等信息,。

（2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型，Elisa,，WB,，IHC，ICC,，還是FACS,。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說明 書沒有提及的應(yīng)用類型,，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請根據(jù)說明書列出的已驗(yàn)證的類型來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的 抗體,。

（3）確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬,，Human，Mouse,，還是Rat,。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請根據(jù)說明書列出已驗(yàn)證的種屬來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體,。

（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì),。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,，蛋白空間構(gòu)象的改變,，會影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

（5）單多克隆抗體的選擇,。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對小,，檢測抗原靈敏度相對就低,；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng),，靈敏度高,，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）,。

2. 二抗選擇要點(diǎn)

（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,，如一抗是小鼠來源,，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）,。

（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP,、Biotin,、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明,、FITC,、Cy3等常用熒光素。

抗體的穩(wěn)定性

1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進(jìn)化的結(jié)果,?？贵w是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果,。在眾多物種中,，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

2. 抗體分子的高Tm值,。在室溫下,，甚至短時間溫度達(dá)到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊,，保持應(yīng)有的活性,。

3. 抗體的純度。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù),，確?？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性,。

4. 抗體的濃度,。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好,，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml,。上海慧穎生物科技細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項(xiàng)：

怎樣保存已獲得的抗體,？

抗體無論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融,，收到抗體后請根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,，對抗體進(jìn)行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融（反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變 性,，導(dǎo)致多聚體形成,，從而降低抗體的結(jié)合能力）。抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果,，如果抗體保存得當(dāng),，抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。 請謹(jǐn)記，無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后，請務(wù)必在4℃,，12000rpm，離心3分鐘,，（無論是液體還是凍干粉狀態(tài)）,，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長 離心時間至5分鐘,，以保證全部抗體均離心下來）,。抗體一般使用特制的儲存管,，只有在12000rpm離心3分鐘,，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下 來（即使是在10000rpm離心也會離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）,。

2. 對于ProSci大部分抗體,，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃,。

（1）對絕大多數(shù)抗體來說,，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會更好,。

（2）分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害,，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。

（3）分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好,，zui少不能少于10ul每份,。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響,。

（4）復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完,，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來,。

（5）抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,，4℃保存盡量不要超過1天,。

（6）避免將抗體保存在自動除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層,，避免溫度變化造成反復(fù)凍融,。

3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。

4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1~2周的時間,，所以是在低溫4℃的條件下來完成的,。

4℃運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時抗體是凍起來的,，為了分裝就需要解凍,，這就多了一次凍融的過程），所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸,。

關(guān)于*（sodium azide）的使用：

為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）,。ProSci的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*,，在說明書的儲存緩沖液中有標(biāo)明。

注：*的去除方式

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除,，IgG的分子量是150kDa（IgM約600kDa）,；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除,。

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