HEC-1-B細胞,，HEC-1-B細胞株

細胞名稱：HEC-1-B細胞，HEC-1-B細胞株

傳代方法：消化3-5分鐘,。1:2.3天長滿

傳代情況：不詳

支原體檢測：陰性

使用權限：A類

HEC-1-B細胞,，HEC-1-B細胞株備注：　

怎樣選擇適合你實驗需要的抗體？

1. 一抗選擇要點

（1）確定抗體的名字,，注意中英文名字,、它名、亞型等信息,。

（2）確定你的實驗類型,，Elisa，WB,，IHC,，ICC，還是FACS,。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型,，如果抗體說明 書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型,，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證,，請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的 抗體,。

（3）確定實驗樣本的種屬，Human,，Mouse,，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種實驗,，請根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體,。

（4）樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇zui合適的抗體,，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應,。

（5）單多克隆抗體的選擇,。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強,，但親和力相對小,，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱,，但抗體的親和力強,，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）,。

2. 二抗選擇要點

（1）種屬來源,。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源,，那二抗就買抗小鼠的即可（羊,、兔等均可）。

（2）標記物的選擇,。有HRP,、Biotin、熒光素等標記物,。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,，以與后面的SP結合反應，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,，如羅丹明,、FITC、Cy3等常用熒光素,。

抗體的穩(wěn)定性

1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界長期進化的結果,。抗體是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結果,。在眾多物種中,，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結構。

2. 抗體分子的高Tm值,。在室溫下,，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊,，保持應有的活性,。

3. 抗體的純度。采用先進的抗體純化技術,，確?？贵w產品的高純度，保障其抗體產品的穩(wěn)定性,。

4. 抗體的濃度,。高濃度的抗體產品可減少容器表面吸附造成的物質損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好,，抗體產品中93%的濃度大于0.5mg/ml,。上?；鄯f生物科技細胞培養(yǎng)的注意事項：

怎樣保存已獲得的抗體,？

抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融，收到抗體后請根據實驗的需要,，對抗體進行分裝,，避免同一管抗體反復凍融（反復凍融會導致抗體空間結構變 性，導致多聚體形成,，從而降低抗體的結合能力）,。抗體保存得當與否,，直接決定了抗體的活性和使用效果,，如果抗體保存得當，抗體活性大部分都可以維持數(shù)年,。 請謹記,，無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后,，請務必在4℃,，12000rpm,，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul,，請延長 離心時間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）。抗體一般使用特制的儲存管,，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內的抗體全部離心下 來（即使是在10000rpm離心也會離心不*,，導致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）,。

2. 對于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是,，分裝后保存在-20℃或者-80℃,。

（1）對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就*足夠了,，沒有任何證據顯示保存在-80℃會更好,。

（2）分裝可以zui大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性,。

（3）分裝的量以一次實驗用完為好,，zui少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小,，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響,。

（4）復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃,，避免再凍起來,。

（5）抗體工作液應該當天配制當天用完，4℃保存盡量不要超過1天,。

（6）避免將抗體保存在自動除霜冰箱中,，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復凍融,。

3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響,。

4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃的條件下來完成的,。

4℃運輸zui主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸,，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍,，這就多了一次凍融的過程）,，所以運輸過程中避免干冰運輸。

關于*（sodium azide）的使用：

為了防止微生物污染,，*經常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）,。ProSci的絕大部分抗體已經含有了0.02％-0.05%的*，在說明書的儲存緩沖液中有標明,。

注：*的去除方式

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除,，IgG的分子量是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除,。

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