HRT-S1細(xì)胞 HRT-S1細(xì)胞 中文名稱(chēng)：結(jié)腸癌細(xì)胞系,，人,。慧穎提供HRT-S1細(xì)胞價(jià)格,，支原體檢測(cè)報(bào)告,，形態(tài)，來(lái)源,，STR鑒定，細(xì)胞特征特性,，培養(yǎng)條件,，操作注意事項(xiàng)，訂購(gòu)流程,，復(fù)蘇周期（貨期）,，售后說(shuō)明等?；鄯f生物注重產(chǎn)品品質(zhì),，提供zui的產(chǎn)品和售后，自公司成立以來(lái),，獲得了同行業(yè)的*,。六月，是繁忙的,，六月是收獲的季節(jié),，沉甸甸的麥穗，已經(jīng)顆粒歸倉(cāng),。六月我們一起前行,，成就人生，慧穎祝您萬(wàn)事如意,，心想事成,。

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封閉

在轉(zhuǎn)膜之后,，也就是抗體孵育之前,，需要對(duì)膜進(jìn)行封閉。封閉是為了使抗體僅僅只能跟特異的蛋白質(zhì)結(jié)合而不是和膜結(jié)合,。常用的封閉液有BSA,，脫脂奶粉，血清等,，一般用的是脫脂奶粉,。脫脂奶粉有些特殊情況是不適用的 ，脫脂奶粉不能與生物素化或伴刀豆蛋白標(biāo)記的抗體一起使用,；不能用于磷酸化抗體對(duì)蛋白磷酸化的檢測(cè),；不能用于堿性磷酸酶（AP）顯示方法。

抗體孵育——WB真正的難點(diǎn)：抗體的使用是一種藝術(shù),，一種抗體一個(gè)脾氣,。

對(duì)WB結(jié)果有決定性影響的因素是抗體的效價(jià)和如果正確使用手中的抗體,。 無(wú)論你如何提高自己的轉(zhuǎn)膜技術(shù)，和低效之間往往只有數(shù)倍的差異,， 而抗體的效價(jià)可以差數(shù)千倍以上,；同樣，正確使用抗體可以保證抗體效價(jià) 不被過(guò)分的拮抗,，謀求特異性和非特異性背景之間差異的zui大化,。

一抗：*抗體能和非抗體性抗原特異性結(jié)合的蛋白，包括單克隆抗體和多克隆抗體,；二抗：第二抗體能和一抗結(jié)合,，即抗體的抗體，其主要作用是檢測(cè)抗體的存在,，放大一抗的信號(hào),。一般二抗都會(huì)偶聯(lián)可以檢測(cè)的標(biāo)記（如熒光、放射性,、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)）,，用來(lái)檢測(cè)一抗；如果一抗本身偶聯(lián)有這些標(biāo)記,，則不需要二抗,，就是所謂的直接WB。

那么如何正確的來(lái)選擇二抗呢,？*根據(jù)一抗的種屬來(lái)源選擇二抗,；第二根據(jù)一抗的類(lèi)型選擇二抗，根據(jù)單體數(shù)量和重鏈分類(lèi),，將抗體分為IgA,，IgD，IgE,，IgG,，IgM五類(lèi)。其中又可分為幾個(gè)亞型：IgA1-2,，IgG1a,，2a，2b,，3,，IgM1-2。

顯色

酶促反應(yīng)可以搭配不同的底物從而實(shí)現(xiàn)不同的顯色方法：化學(xué)發(fā)光Chemiluminescent 和底物顯色Colormetirc/Chromogen,，前者靈敏度很高——隨著各大廠家努力開(kāi)發(fā)研制靈敏度更高的發(fā)光底物,，化學(xué)發(fā)光法的靈敏度已經(jīng)達(dá)到pg別，甚至還有 Femto級(jí)別的,，靈敏度超過(guò)了同位素,；而后者由于直接顯色而操作簡(jiǎn)便且成本低,。zui為大家熟悉當(dāng)數(shù)辣根過(guò)氧化物酶HRP（Horseradish Peroxidase，屬于過(guò)氧化物酶POD類(lèi)）和堿性磷酸酶AP（Alkaline Phosphatase）,，此外還有比較少見(jiàn)的葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase）,、β半乳糖苷酶 β-Galactosidase 。

常見(jiàn)問(wèn)題分析：

1.曝光后背景過(guò)高且不均勻

封閉不充分：延長(zhǎng)封閉時(shí)間,，更換合適的封閉劑,；一抗?jié)舛冗^(guò)高：增加一抗稀釋倍數(shù)；抗體孵育溫度過(guò)高：4℃孵育,；二抗非特異性結(jié)合或與封閉劑交叉反應(yīng)：設(shè)置二抗對(duì)照（不加一抗）,，降低二抗?jié)舛取?/span>

洗膜不充分：增加洗膜次數(shù)

2.沒(méi)有陽(yáng)性條帶或很弱

一抗、二抗不匹配：訂購(gòu)試劑時(shí)認(rèn)真選取一抗與組織種屬,，一抗與二抗或底物與酶系統(tǒng)之間相匹配的抗體及底物,，可通過(guò)設(shè)置內(nèi)參驗(yàn)證二級(jí)系統(tǒng)的有效性； 更換更好的抗體,；一抗,，二抗?jié)舛鹊停涸黾涌贵w濃度，延長(zhǎng)孵育時(shí)間封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)：封閉時(shí)使用溫和的去污劑,，更換封閉劑樣本中無(wú)靶蛋白或靶蛋白含量過(guò)少,，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，如果陽(yáng)性對(duì)照有結(jié)果,，但標(biāo)本沒(méi)有則可能是標(biāo)本中不含靶蛋白或是靶蛋白含量太低,，后者可增加樣本上樣量；轉(zhuǎn)膜不充分還洗膜過(guò)度：使用麗春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果,，PVDF膜需浸透,，正確的轉(zhuǎn)膜操作，勿過(guò)度洗膜,；曝光時(shí)間過(guò)短：延長(zhǎng)曝光時(shí)間,，更換更靈敏的發(fā)光液

3.背景有白色/黑色斑

轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡或抗體分布不均：盡量除去氣泡,，抗體孵育時(shí)保持搖動(dòng),；封閉劑溶解不充分有顆粒狀

HRT-S1細(xì)胞 HRT-S1細(xì)胞凍存：

１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心,，棄上清

２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）

３．加１．５凍存液在離心管中,，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．

放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)ye,，第二天放入液氮罐保存.

HRT-S1細(xì)胞 HRT-S1細(xì)胞常見(jiàn)的污染如下：

1,、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同,，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。

2,、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的,，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天,，仍清亮,，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,，可看到明顯的菌絲,，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后,，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差,，

用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅,?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤(pán)加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

3,、支原體：黑色的,，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,，原體感染,，國(guó)內(nèi)血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中zui常見(jiàn)的微生物之一,。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是慢慢凋亡,。

4、黑蛟蟲(chóng)：可以穿透濾膜,，也可以通過(guò)空氣傳播,，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去,，培養(yǎng)液也是不渾的,，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的,。

5,、真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物,，有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片,，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀,，不象細(xì)胞碎片分不清,，慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢,，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了,。

6,、原蟲(chóng)：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,，輕微活動(dòng),，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好,，邊緣不清楚,，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng),。這種共生是非常普遍的,，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),，zui終形成惡性循環(huán)。

HRT-S1細(xì)胞 HRT-S1細(xì)胞  運(yùn)輸：凍存的細(xì)胞干冰運(yùn)輸,，復(fù)蘇的細(xì)胞冰袋運(yùn)輸,。冬季我們會(huì)選擇全血清包被細(xì)胞株運(yùn)輸，運(yùn)輸途中細(xì)胞處于休眠狀態(tài),，避免天氣過(guò)冷導(dǎo)致的細(xì)胞死亡,。