上?；鄯f生物提供人源細(xì)胞STR鑒定服務(wù),，價(jià)格很便宜，800元/株,，量大更優(yōu)，提供具體的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,。除人源細(xì)胞（ATCC推薦的11個(gè)位點(diǎn)+9個(gè)多態(tài)位點(diǎn)）鑒定外,，還提供小鼠品系鑒定（SNP方法）以及小鼠細(xì)胞STR分型鑒定（9個(gè)STR位點(diǎn)+兩個(gè)人源污染位點(diǎn)）,。

慧穎生物有10年SNP分型經(jīng)驗(yàn)，已經(jīng)完成的SNP分型數(shù)據(jù)近千萬(wàn),，采用LDR技術(shù)發(fā)表的SCI論文數(shù)百篇,，并且有3篇發(fā)表于*期刊Nature Genetics上。具有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格,！我們公司還有SNP分型服務(wù),；STR分型；分子遺傳學(xué),、分子生物學(xué)服務(wù)（SNP/STR分型,、CNV檢測(cè)、測(cè)序,、Real time qPCR,、microRNA檢測(cè)、MCF基因表達(dá)分析系統(tǒng),、定制PCR array）

在正常細(xì)胞中,，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期,，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè),。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,，故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合,。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細(xì)胞核的變化,，而此時(shí)Propidium Iodide（PI）不能通過(guò)細(xì)胞膜。

細(xì)胞壞死時(shí),，雖然也會(huì)發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻,，但此時(shí)細(xì)胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合,，發(fā)出紅色熒光,。所以Annexin V-FITC(綠色熒光)常與鑒定細(xì)胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來(lái)區(qū)分凋亡細(xì)胞與死亡細(xì)胞,。

技術(shù)原理及步驟

1. 離心收集細(xì)胞,，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000 rpm，離心時(shí)間5 min,，棄培養(yǎng)基,。

2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。

3. 用400 μL1× Binding Buffer懸浮細(xì)胞,，濃度大約為1×106 cells/mL,。

4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC,，輕輕混勻后于2~8°C避光條件下孵育15min。

5. 加入10 μL PI后輕輕混勻于2~8°C避光條件下孵育5 min,。

6. 在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè),。

應(yīng)用實(shí)例

應(yīng)用領(lǐng)域

細(xì)胞的早期凋亡及區(qū)分凋亡與壞死細(xì)胞

服務(wù)周期

我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托2個(gè)星期左右完成實(shí)驗(yàn)并提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

客戶(hù)須知（對(duì)材料的要求,、注意事項(xiàng)）

需提供細(xì)胞類(lèi)型,，處理?xiàng)l件。

慧穎生物專(zhuān)業(yè)血清10年,，我們不生產(chǎn)血清,，我們只是高品質(zhì)動(dòng)物血清的搬運(yùn)工

血清是一種成分復(fù)雜的混合物，不同批次血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用不同,。大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中由血清引起的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

1,、細(xì)胞生長(zhǎng)速度緩慢，長(zhǎng)滿(mǎn)單層時(shí)間長(zhǎng),；從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞,，用同一種培養(yǎng)液，分別加入10％的對(duì)照血清和待檢血清,，在相同條件下培養(yǎng)72小時(shí),，會(huì)出現(xiàn)對(duì)照血清長(zhǎng)滿(mǎn)單層，而待檢血清大約只有60～70％,，這種血清就不適合用來(lái)大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞,。

2、細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常,，細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化 ,；由于血清的質(zhì)量問(wèn)題，使原本狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會(huì)變差,；比如：細(xì)胞瓶里會(huì)出現(xiàn)一些蠕動(dòng)的小黑點(diǎn)（并非污染）,，或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物；細(xì)胞的輪廓變得模糊,，細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充,，從而影響細(xì)胞向四周擴(kuò)展生長(zhǎng)。

3,、細(xì)胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象,，不能連續(xù)傳代 ；質(zhì)量較差的血清缺乏某種細(xì)胞的貼壁因子,，會(huì)使細(xì)胞在傳代過(guò)程中逐漸喪失貼壁的能力,。細(xì)胞會(huì)從正常的貼壁狀態(tài)，邊緣開(kāi)始萎縮，上翹,。觀察到的現(xiàn)象就是細(xì)胞表面不光滑,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶會(huì)看到細(xì)胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動(dòng),。隨著傳代次數(shù)增加,，細(xì)胞萎縮的情況越來(lái)越嚴(yán)重，直到zui終*脫壁而死亡,。

4,、細(xì)胞長(zhǎng)的很好，致密的單層,，狀態(tài)也很正常,，但是接毒后細(xì)胞基本不發(fā)生病變，做滴度檢測(cè)幾乎測(cè)不出抗原滴度,。這種情況也許是因?yàn)檠逯泻信c接種的病毒有同源的特異性抗體,。比如血清中經(jīng)常會(huì)存在乙腦抗體，牛腹瀉病毒抗體等,，如果存在這些抗體,，就會(huì)把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高,，病毒會(huì)被抗體*中和,，就沒(méi)有病毒顆粒在細(xì)胞中增殖，所以會(huì)檢測(cè)不到病毒滴度,。這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的,，不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費(fèi)，浪費(fèi)人力,、物力,，尤其是時(shí)間上的浪費(fèi)，從培養(yǎng)細(xì)胞開(kāi)始到接病毒,，到收液至少需要一兩個(gè)月,，一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況，那么這一兩月時(shí)間就白白浪費(fèi)掉了,，這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險(xiǎn)之一,。

5、細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)一般,，產(chǎn)毒少,，毒價(jià)低。這種情況比較常見(jiàn),，細(xì)胞是病毒的載體,，由于血清質(zhì)量不好，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，病毒就無(wú)法進(jìn)行正常的復(fù)制,。并非所有病毒都不能復(fù)制,，所以就造成疫苗的效價(jià)不夠，可能造成不合格產(chǎn)品,。

看來(lái)一款血清直接關(guān)系細(xì)胞的生死存亡,，不用擔(dān)心，慧穎提供無(wú)支原體,，低內(nèi)毒素和低血紅素的,，無(wú)反復(fù)凍融的高品質(zhì)活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱賣(mài)產(chǎn)品主要有：Gibco12676-029,，SERANA S-FBS-AU-045,，HycloneSH30068.03,HycloneSH30068.03HI等。