產(chǎn)品標題：HBMEC細胞株

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簡介：全國統(tǒng)一價格,，全國各地均可發(fā)貨

lncRNA 的研究已經(jīng)在世界范圍內(nèi)變得越愛越熱門,，通過這些年的研究,，lncRNA的機制研究也形成了一定的套路：

1）高通量分析lncRNA的表達,；

2）驗證高通量篩選后的結(jié)果；

3）研究lncRNA與蛋白之間的相互作用。

接下來的文章中,，慧穎生物會和大家一起討論lncRNA機制研究中常用的方法,，歡迎小伙伴們積極參與討論。

（一）高通量分析lncRNA 的表達

隨著lncRNA研究的不斷深入,，現(xiàn)在已經(jīng)有了很多很成熟的lncRNA芯片產(chǎn)品,，可供選擇。另外二代測序的興起,，也使得RNA-seq成為分析lncRNA表達譜的有效手段,。當(dāng)然從費用的角度講，lncRNA 的芯片更便宜,，二代測序RNA-seq的成本更高,。不過土豪請隨意！

應(yīng)用lncRNA芯片或者RNA-seq進行l(wèi)ncRNA表達譜分析的研究已經(jīng)有了很多,。例如,，Orom等人在人類的細胞系中通過lncRNA的芯片篩選，鑒定了3019條lncRNA的表達分布,。另外,，Ng等通過定制化的lncRNA芯片（customized microarray）研究了人胚胎干細胞（human embryonic stem cell，hESCs）內(nèi)的lncRNA表達譜（expression profile）,。他們發(fā)現(xiàn)有一些胚胎干細胞特異性的lncRNA對于維持干細胞的多能性（pluripotency）有非常重要的作用,。在腫瘤研究（乳腺癌、胰腺癌,、肝癌等）中,，lncRNA芯片的應(yīng)用也是非常地廣泛。

相對于lncRNA芯片在表達譜研究方面的廣泛應(yīng)用,，RNA-seq方法的應(yīng)用領(lǐng)域則明顯地不同,。RNA-seq 主要用于研究轉(zhuǎn)錄組。應(yīng)用該方法,，獲得的結(jié)果受到的干擾信號（background signal）比較低,，更重要的是，通過RNA-seq有可能獲得全新的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（當(dāng)然包括lncRNA在內(nèi),，但是不局限于lncRNA,。例如在腫瘤研究中，常用RNA-seq去發(fā)現(xiàn)新的融合基因,。利用RNA-seq技術(shù),，研究人員發(fā)現(xiàn)某些lncRNA分子在神經(jīng)精神疾病（neuropsychiatric disorder）中發(fā)揮重要作用,。另有研究者通過RNA-seq技術(shù),，分析了肝細胞癌（HCC）中的整個轉(zhuǎn)錄組，當(dāng)然也包括了lncRNA。

（二）對于高通量數(shù)據(jù)的驗證

常用的驗證高通量數(shù)據(jù)的實驗手段有：Northern blot,、qRT-PCR,、FISH及RNAi 等方式。

目前zui為常用的檢測lncRNA表達的手段是qRT-PCR,，它的操作簡單,，自動化程度高，在實驗室普遍使用,。FISH的實驗方法,，使用的實驗室就相對較少。FISH和Northern 類似的地方是,，它同樣是基于分子雜交的原理,。使用FISH的一大優(yōu)勢是，它不僅可以表征lncRNA表達量的多少,，更可以直觀地告訴研究者lncRNA在亞細胞/組織中的定位,。

研究者成功地使用該方法研究了多條lncRNA，包括Xist,、MALAT1,、MENε/β和Kcnq1ot1等。RNAi是另一種廣泛使用的實驗手段,，在細胞中特異性地敲減lncRNA,，是檢測lncRNA功能時，zui常用的實驗方法,。例如,，HOTAIR的5'區(qū)域和3'區(qū)域可以分別結(jié)合PRC2和LSD1，并起到一個腳手架（Scaffold）的作用,。研究者通過RNAi的方式,，敲減細胞內(nèi)源性HOTAIR分子，證實了該分子在結(jié)構(gòu)上的作用和功能,。需要注意的是,，以上的多種方法可以相互結(jié)合，以驗證篩選獲得的lncRNA的表達及其可能發(fā)揮的功能,。

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