標(biāo)題名稱(chēng)：SH-SY5Y SH-SY5Y細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

細(xì)胞介紹：

SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y),。 該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細(xì)胞的飽和密度大于1X10⁶細(xì)胞/cm²,。

細(xì)胞特性：

1. 來(lái)源：腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,，轉(zhuǎn)移部位骨髓
2. 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3. 含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL
4. 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5. 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1. 準(zhǔn)備MEM及F-12培養(yǎng)基(MEM(GIBCO,貨號(hào)41500034,，添加NaHCO₃ 1.5g/L,，丙酮酸鈉 0.11g/L)，45%,；F-12(GIBCO,貨號(hào)21700075,，添加L-谷氨酰胺 300mg/L, NaHCO₃ 1.5g/L)，45%),；胎牛血清,，10%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
4. .細(xì)胞處理：
   1. 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)隔夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
   2. 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們,。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

SH-SY5Y SH-SY5Y細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)-慧穎細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)：1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子,，覺(jué)得這樣可以避免污染。如遇到有培養(yǎng)基越來(lái)越呈現(xiàn)紫色現(xiàn)象,，是因?yàn)闊靠跓?。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候,，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi),。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái),。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢,。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少,。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口,。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈,。2. 不要頻繁看細(xì)胞,。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細(xì)胞越是養(yǎng)不好,，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處,，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后,，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的,。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)纬捎欣谏L(zhǎng)的局部環(huán)境,。你跑去看細(xì)胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細(xì)胞,，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好,。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng),。3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候,，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度,，早早地終止消化,。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡,。在我看來(lái),，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大,。在做血管平滑肌原代的時(shí)候,，37度消化隔夜，細(xì)胞也沒(méi)事,。我們一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化,。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有,，動(dòng)作要輕柔,，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大,，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的,。

MCF-10A MCF-10A細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

MHCC-97L MHCC-97L細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

MHCC-97H  MHCC-97H細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

3AO 3AO細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

A549 A549細(xì)胞  細(xì)胞株培養(yǎng)

SKOV3 SKOV3細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

HK-2 HK-2細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

KPL-4 KPL-4細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

SH-SY5Y SH-SY5Y細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

IOSE80 IOSE80細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

A2780/DDP A2780/DDP細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)