標題名稱：SH-SY5Y SH-SY5Y細胞 細胞株培養(yǎng)

細胞介紹：

SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y),。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X10⁶細胞/cm²,。

細胞特性：

1. 來源：腦神經(jīng)母細胞瘤,，轉(zhuǎn)移部位骨髓
2. 形態(tài)：上皮細胞樣
3. 含量：>1x10⁶ 個/mL
4. 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5. 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。收到細胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1. 準備MEM及F-12培養(yǎng)基(MEM(GIBCO,貨號41500034,，添加NaHCO₃ 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L),，45%,；F-12(GIBCO,貨號21700075，添加L-谷氨酰胺 300mg/L, NaHCO₃ 1.5g/L),，45%),；胎牛血清，10%,。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
4. .細胞處理：
   1. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)隔夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
   2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

1棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們,。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

SH-SY5Y SH-SY5Y細胞 細胞株培養(yǎng)-慧穎細胞庫培養(yǎng)經(jīng)驗：1. 不要燒瓶口,。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,，覺得這樣可以避免污染。如遇到有培養(yǎng)基越來越呈現(xiàn)紫色現(xiàn)象,，是因為燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進入瓶內(nèi),。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當然會變堿。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢,。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下,，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼,。如果有細菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈,。2. 不要頻繁看細胞,。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看,。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好,。老手細胞一扔好幾天不管,，細胞瘋長。3. 不要怕消化,。在傳代的時候,，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化,。細胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打?qū)毎膿p傷比消化更大,。在做血管平滑肌原代的時候，37度消化隔夜,，細胞也沒事,。我們一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時的機械應力相當大,，對細胞的傷害也是很大的。

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