標(biāo)題名稱：MLE-12 MLE-12細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

一,、名稱：MLE-12細(xì)胞

二、生長(zhǎng)特性： 貼壁

三,、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：

培養(yǎng)基  90%     DMEM

血清   10%原裝10099141 FBS

溫度     37℃

空氣條件    5% CO2,，,95% AIR

生長(zhǎng)代數(shù)    P4

凍存條件    培養(yǎng)基50%,、血清40%、DMSO10%

四,、組成：

組份    規(guī)格

細(xì)胞一瓶    T25

細(xì)胞培養(yǎng)與操作說(shuō)明  1份

五,、細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法：

1、收到細(xì)胞,，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁,，如有請(qǐng)盡快,。

2、收到細(xì)胞,，如包裝完好,，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，先不要把培養(yǎng)基吸出來(lái)。應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁,。如細(xì)胞仍不能貼壁,，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理

3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí),，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,。噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作：然后打開(kāi)蓋子,，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右,，放在離心管里，然后瓶口過(guò)火,，（嚴(yán)禁直接傾倒）,，這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管,，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出,，放于離心管中,，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。

如為懸浮細(xì)胞,，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3-5分鐘,，吸出上清,，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

4,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,，存放于4℃冰箱,，以備不時(shí)之需。第二天換液時(shí),，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進(jìn)口胎牛血清,。這樣對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)更好。不要再用我們?cè)康呐囵B(yǎng)基了,。

5 ,、24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,，就可以傳代了,。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去,。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘,，不超過(guò)5分鐘,。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動(dòng)瓶壁,，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化,。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落,，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,，1000rpm/5min。棄上清,，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二,，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可,。

6，貼壁細(xì)胞 ,，懸浮細(xì)胞,。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進(jìn)口胎牛血清,，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞,。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞,，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,，若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,，血清濃度還是在10％,。

特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）

1.  收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）

2.  貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育隔夜到第二天再做消化傳代,，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)

3.  如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并慧穎細(xì)胞庫(kù)客服人員

PC-12(低分化)細(xì)胞*大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)

PC-12(高分化)細(xì)胞*大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)

PC-12(未分化)細(xì)胞*大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)

PC-13細(xì)胞*人前列腺癌

PC-3 細(xì)胞*人前列腺

Phix-293T細(xì)胞*人胚腎細(xì)胞(Ad5DNA化)

PIEC細(xì)胞*豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

PK136細(xì)胞*小鼠X小鼠

PK-15細(xì)胞*豬腎細(xì)胞

PLC/PRF/5細(xì)胞*人肝癌亞力山大細(xì)胞

Psi2 DAP細(xì)胞*小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

PSN1細(xì)胞*人胰腺癌細(xì)胞

Pt K1 (NBL-3)細(xì)胞*袋鼠腎細(xì)胞

QCY-7703細(xì)胞*人肝癌細(xì)胞

QGY-7701細(xì)胞*人肝癌細(xì)胞

RAW264.7細(xì)胞*小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞

RBE細(xì)胞*人肝膽管癌細(xì)胞