標題名稱：MLE-12 MLE-12細胞 細胞株培養(yǎng)

一,、名稱：MLE-12細胞

二、生長特性： 貼壁

三,、細胞生長條件：

培養(yǎng)基  90%     DMEM

血清   10%原裝10099141 FBS

溫度     37℃

空氣條件    5% CO2,，,95% AIR

生長代數    P4

凍存條件    培養(yǎng)基50%、血清40%,、DMSO10%

四,、組成：

組份    規(guī)格

細胞一瓶    T25

細胞培養(yǎng)與操作說明  1份

五、細胞傳代培養(yǎng)方法：

1,、收到細胞,，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁,，如有請盡快。

2,、收到細胞,，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞,。,由于運輸過程中的問題,，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態(tài)時,，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,，先不要把培養(yǎng)基吸出來。應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,，讓細胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁,。如細胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理

3. 收到細胞時如無異常情況 ,，請在顯微鏡下觀察細胞密度,，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時,，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作：然后打開蓋子,，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右,，放在離心管里，然后瓶口過火,，（嚴禁直接傾倒）,，這樣可以保證不污染，再用10ML的移液管,，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出,，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過80%匯合度時,，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。

如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液,，1000轉/分鐘離心3-5分鐘，吸出上清,，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。

4，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松,。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱,，以備不時之需,。第二天換液時,，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進口胎牛血清。這樣對細胞生長更好,。不要再用我們原瓶的培養(yǎng)基了,。

5 、24小時后,，細胞形態(tài)已恢復并貼滿瓶壁,，就可以傳代了。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去,。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準,，一般1-3分鐘,，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來,，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化,。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落,，然后將溶液吸入離心管內離心,，1000rpm/5min。棄上清,，視細胞數量決定分瓶數,，一般一傳二，如細胞量多可一傳三,，有些細胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準,。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可。

6,，貼壁細胞 ,，懸浮細胞。嚴格無菌操作,。換液時,，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進口胎牛血清，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細胞后,，請鏡下觀察細胞,，用恰當方式處理細胞,。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞,，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,，若細胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右 ,，血清濃度還是在10％,。

特別注意：（如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）

1.  收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時）

2.  貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育隔夜到第二天再做消化傳代,，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)

3.  如簽收時出現培養(yǎng)瓶壁破裂,，漏液等情況請及時做好照片記錄并慧穎細胞庫客服人員

PC-12(低分化)細胞*大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)

PC-12(高分化)細胞*大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)

PC-12(未分化)細胞*大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化)

PC-13細胞*人前列腺癌

PC-3 細胞*人前列腺

Phix-293T細胞*人胚腎細胞(Ad5DNA化)

PIEC細胞*豬髖動脈內皮細胞

PK136細胞*小鼠X小鼠

PK-15細胞*豬腎細胞

PLC/PRF/5細胞*人肝癌亞力山大細胞

Psi2 DAP細胞*小鼠胚胎成纖維細胞

PSN1細胞*人胰腺癌細胞

Pt K1 (NBL-3)細胞*袋鼠腎細胞

QCY-7703細胞*人肝癌細胞

QGY-7701細胞*人肝癌細胞

RAW264.7細胞*小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

RBE細胞*人肝膽管癌細胞