文章標題：MC38細胞 MC38細胞 細胞株培養(yǎng)

文章來源：慧穎細胞庫

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MC38細胞 MC38細胞 細胞株培養(yǎng)

如何預(yù)防細胞培養(yǎng)的污染和清除這些污染物呢,？慧穎 細胞庫 技術(shù)為您解答：

一,、污染的預(yù)防

預(yù)防是防止細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前,，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度,。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

1-從操作者做起

1操作者責(zé)任心要強，要細心穩(wěn)重,，操作技術(shù)要熟練,。進無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿隔離衣,。進入后關(guān)好門,，坐下來盡量少走動。工作開始要先用75%酒精棉球擦手,、擦瓶口和燒灼瓶口,。事先要嚴格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),，更不能隨便使用，以免造成大批污染。

2,、操作者動作要輕,，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼,。操作時盡量不要談話,，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。

3,、操作時要常更換吸管,，切勿一根吸管做到底。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去,。實驗完畢及時收拾,，保持實驗室清潔整齊，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面,。

2-從物品,、用品消毒滅菌著手

細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,，各種溶液滅菌除菌要仔細,，并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌,。

3-防止細胞交叉污染

在進行多種細胞培養(yǎng)操作時,，所用器具要嚴格區(qū)分，做上標記便于辨別,。并按順序進行操作,，避免一起進行時易發(fā)生混亂。

在進行換液或傳代操作時,，注射器和滴管不要觸及細胞培養(yǎng)瓶瓶口,，以免把細胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細胞。

所有細胞一旦購置,，或從別處引入,，或自己建立，均應(yīng)及早留種凍存,，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,，重新培養(yǎng)。

二,、污染的清除

培養(yǎng)細胞一經(jīng)污染,，多數(shù)較難處理。如果污染細胞價值不大,，宜棄之,；有細胞株留存的或可購置的,，可在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細胞,，再培養(yǎng),。若污染細胞價值較大，又難于重新得到,，可采取以下辦法清除。

1-使用抗生素

抗生素對殺滅細菌較有效,。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好,。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL）,，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法,，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液,。此法在污染早期可能有效,。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外,，還可用慶大霉素,、卡那霉素、多粘菌素,、四環(huán)素,、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,，每隔2～3日換液1次,，傳1～2代進行治療。近年來有報道,，4-氟,，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效,。這三種抗生素均用PBS配成250濃縮液,，-20℃保存?zhèn)溆茫褂脻舛菴ip為10μg/mL,，BM-1為10μg/mL,，BM-2為5μg/mL。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液,，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液,，3天后再吸除培養(yǎng)液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液,，培養(yǎng)4天,，如此連續(xù)3個輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次,。

2-使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染,，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,，并且5個月后仍為陰性,。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便,、經(jīng)濟,。

3-加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體,，但對細胞有不良影響,。所以在處理前要進行預(yù)試驗，摸索能zui大限度殺死支原體又對細胞影響zui小的加熱時間,。此法有時不可靠,。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳,。

4-其他方法

除了上述去除污染的方法外,，還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細胞吞噬法,、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,，但均較麻煩，且效果不確定,。所以一旦支原體污染,，除非有特別重要價值，一般均棄之重新培養(yǎng),。

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