標(biāo)題名稱：HCT-8細(xì)胞  細(xì)胞株培養(yǎng) 

HCT-8細(xì)胞  細(xì)胞株培養(yǎng) （如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)的污染和清除這些污染物呢,？）慧穎 細(xì)胞庫 技術(shù)為您解答：

一、污染的預(yù)防

預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法,。只有預(yù)防工作做在前,，才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

1-從操作者做起

1操作者責(zé)任心要強(qiáng),，要細(xì)心穩(wěn)重,，操作技術(shù)要熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,，按規(guī)定穿隔離衣,。進(jìn)入后關(guān)好門，坐下來盡量少走動,。工作開始要先用75%酒精棉球擦手,、擦瓶口和燒灼瓶口。事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用,，以免造成大批污染,。

2、操作者動作要輕,，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。操作時盡量不要談話,，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面,。

3、操作時要常更換吸管,，切勿一根吸管做到底,。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實驗完畢及時收拾,，保持實驗室清潔整齊,，zui后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

2-從物品,、用品消毒滅菌著手

細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗,、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),，并在無菌試驗陰性后才能使用,。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

3-防止細(xì)胞交叉污染

在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時,，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,，做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作,，避免一起進(jìn)行時易發(fā)生混亂,。

在進(jìn)行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞,。

所有細(xì)胞一旦購置，或從別處引入,，或自己建立,，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,，重新培養(yǎng),。

二、污染的清除

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,，多數(shù)較難處理,。如果污染細(xì)胞價值不大,，宜棄之；有細(xì)胞株留存的或可購置的,，可在尋找原因后*消毒操作室,，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng),。若污染細(xì)胞價值較大,，又難于重新得到，可采取以下辦法清除,。

1-使用抗生素

抗生素對殺滅細(xì)菌較有效,。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好,。預(yù)防用藥一般用雙抗生素（青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL）,，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時,，再換常規(guī)培養(yǎng)液,。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素,、鏈霉素外,，還可用慶大霉素、卡那霉素,、多粘菌素,、四環(huán)素、制霉菌素等,。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,，每隔2～3日換液1次，傳1～2代進(jìn)行治療,。近年來有報道,，4-氟，2-羥基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）,、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物（BM-2）等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效,。這三種抗生素均用PBS配成250濃縮液，-20℃保存?zhèn)溆?，使用濃度Cip為10μg/mL,，BM-1為10μg/mL，BM-2為5μg/mL,。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液,，加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液，3天后再吸除培養(yǎng)液，加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液,，培養(yǎng)4天,，如此連續(xù)3個輪次，直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后,，再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次,。

2-使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清（血凝效價1:320以上）可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長,，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性,。但此法比較麻煩,，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì),。

3-加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,，可殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響,。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗,，摸索能zui大限度殺死支原體又對細(xì)胞影響zui小的加熱時間。此法有時不可靠,。若先用藥物處理后,，再以41℃加溫處理效果更佳。

4-其他方法

除了上述去除污染的方法外,，還有動物體內(nèi)接種除菌法,、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,，但均較麻煩,，且效果不確定。所以一旦支原體污染,，除非有特別重要價值,，一般均棄之重新培養(yǎng)。

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