一、傳代和培養(yǎng)

    工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制,，不得超過5代,，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。

    1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中,，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次,。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn),。

細(xì)菌的接種,、分離和培養(yǎng)

    常用培養(yǎng)基種類：斜面培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基,、液體培養(yǎng)基,、平板培養(yǎng)基。

    接種方法：涂布法,、劃線法,、穿刺法,、直接加入法等

    分離：為了獲得純菌種（株）,，采用的將細(xì)菌分離成單個(gè)細(xì)胞，使其獨(dú)立分裂繁殖形成單個(gè)菌落的操作技術(shù),。

    分離一般采用平板培養(yǎng)基,。

    分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法,、涂布分離法,、傾注分離法等。

    培養(yǎng) ：接種后的培養(yǎng)基,，根據(jù)不同微生物生長(zhǎng)條件的要求,，將培養(yǎng)基放在適宜微生物生長(zhǎng)的環(huán)境中（溫度、濕度、氧氣等）,，使其生長(zhǎng)繁殖的過程,。需氣菌培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。

    培養(yǎng)后微生物的生長(zhǎng)判斷

    固體培養(yǎng)基

    液體培養(yǎng)基 

二,、菌種的檢查與復(fù)壯 

   菌種的衰退

   菌種經(jīng)過長(zhǎng)期人工傳代培養(yǎng)或保藏,，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。

   控制菌種的衰退方法 

⑴控制傳代次數(shù) 盡量避免不必要的接種和傳代,，降低突變幾率,。采用良好的傳代保藏方法?！吨袊?guó)藥典》2010年版規(guī)定,，傳代次數(shù)不得超過5代。

⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件

⑶用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行傳代

⑷采用有效的保藏方法

  定期檢查    

  主要檢查項(xiàng)目：菌落形態(tài),、革蘭染色,、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學(xué)檢查,。 

  菌種的復(fù)壯： 使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性的 過程驗(yàn)室主要采用分離純化的方法,。

三、菌種的管理

1,、使用菌種的單位,，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。  菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理,，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識(shí)和技術(shù)水平,，并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。

2,、實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度,；

包括：每支菌種標(biāo)注名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào),、接種日期,、傳代次數(shù)、進(jìn)出,、收集,、貯藏、保存,、確認(rèn)試驗(yàn)以及銷毀的記錄,、標(biāo)準(zhǔn)菌種的申購記錄、從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株操作記錄,，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代,，鑒定（純度,、特性）、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序,。

3 、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存,，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品,，放置菌種應(yīng)有的冰箱，應(yīng)上鎖管理,。

4,、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對(duì)保存的菌種進(jìn)行檢查,，一般每年1～2次,，（或定期更換凍干菌種）。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時(shí)檢查,。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象,，應(yīng)立即報(bào)告、研究處理,。尤其長(zhǎng)期保存時(shí),。

5、詳細(xì)記錄

   菌種的來源,、接收,、傳代、分離,、復(fù)壯,、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄。包括菌保存位置,、環(huán)境（溫度）,、種傳代或使用時(shí)間、名稱,、菌號(hào),、代數(shù)、傳代或保存形式,、分離,、復(fù)壯方式,、使用內(nèi)容,、鑒定情況等都應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的記錄。

   菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室,，外單位索取,、購買應(yīng)有證明和登記,，并包裝嚴(yán)密。

   菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行,，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄,。

菌懸液的制備與保存：參照《中國(guó)藥典》2010版培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)。

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