一,、傳代和培養(yǎng)

    工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴格控制,，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異,。

    1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中,，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時,，實驗室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進行確認,。

細菌的接種、分離和培養(yǎng)

    常用培養(yǎng)基種類：斜面培養(yǎng)基,、半固體培養(yǎng)基,、液體培養(yǎng)基、平板培養(yǎng)基,。

    接種方法：涂布法,、劃線法、穿刺法,、直接加入法等

    分離：為了獲得純菌種（株）,，采用的將細菌分離成單個細胞，使其獨立分裂繁殖形成單個菌落的操作技術(shù),。

    分離一般采用平板培養(yǎng)基,。

    分離方法主要有分段劃線法、連續(xù)劃線法,、涂布分離法,、傾注分離法等。

    培養(yǎng) ：接種后的培養(yǎng)基,，根據(jù)不同微生物生長條件的要求,，將培養(yǎng)基放在適宜微生物生長的環(huán)境中（溫度、濕度、氧氣等）,，使其生長繁殖的過程,。需氣菌培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。

    培養(yǎng)后微生物的生長判斷

    固體培養(yǎng)基

    液體培養(yǎng)基 

二,、菌種的檢查與復(fù)壯 

   菌種的衰退

   菌種經(jīng)過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏,，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。

   控制菌種的衰退方法 

⑴控制傳代次數(shù) 盡量避免不必要的接種和傳代,，降低突變幾率,。采用良好的傳代保藏方法?！吨袊幍洹?010年版規(guī)定,，傳代次數(shù)不得超過5代。

⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件

⑶用不同類型的細胞進行傳代

⑷采用有效的保藏方法

  定期檢查    

  主要檢查項目：菌落形態(tài),、革蘭染色,、顯微鏡下菌體形態(tài)、生化特性及血清學檢查,。 

  菌種的復(fù)壯： 使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性的 過程驗室主要采用分離純化的方法,。

三、菌種的管理

1,、使用菌種的單位,，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。  菌種應(yīng)由專人負責管理,，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平,，并應(yīng)具有較強的責任心。

2,、實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度,；

包括：每支菌種標注名稱、標準號,、接種日期,、傳代次數(shù)、進出,、收集,、貯藏、保存,、確認試驗以及銷毀的記錄,、標準菌種的申購記錄、從標準菌株到工作菌株操作記錄,，如菌種定期轉(zhuǎn)種傳代，鑒定（純度、特性）,、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,、菌種保存的位置和條件及其它需要的程序。

3 ,、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存,，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種應(yīng)有的冰箱,，應(yīng)上鎖管理,。

4、由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進行傳代,，并定期對保存的菌種進行檢查,，一般每年1～2次，（或定期更換凍干菌種）,。發(fā)現(xiàn)菌種的異常情況應(yīng)及時檢查,。一旦發(fā)現(xiàn)菌種污染和變異現(xiàn)象,，應(yīng)立即報告,、研究處理。尤其長期保存時,。

5,、詳細記錄

   菌種的來源,、接收、傳代,、分離,、復(fù)壯、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細記錄,。包括菌保存位置,、環(huán)境（溫度）、種傳代或使用時間,、名稱,、菌號、代數(shù),、傳代或保存形式,、分離、復(fù)壯方式,、使用內(nèi)容,、鑒定情況等都應(yīng)進行詳細的記錄。

   菌種不得隨意帶出實驗室,，外單位索取,、購買應(yīng)有證明和登記,，并包裝嚴密。

   菌種處理應(yīng)嚴格按操作規(guī)程進行,，滅菌處理應(yīng)有詳細記錄,。

菌懸液的制備與保存：參照《中國藥典》2010版培養(yǎng)基適用性試驗。

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